一氧化氮(Nitric Oxide,NO)是一种极不稳定的生物自由基,分子小,结构简单,可快速透过生物膜扩散,作为一种新型的生物信使分子,在细胞间及细胞内传递信号,在机体的生理、病理过程中起着重要的作用。其广泛分布于生物体内神经、循环、呼吸、消化、泌尿生殖等系统中,特别是神经组织中较丰富。NO易被氧化成亚硝酸盐和硝酸盐,因此,通常要测定亚硝酸盐和硝酸盐的总量来推算出总的一氧化氮的量。本试剂盒采用改进的格里斯法将硝酸盐还原为亚硝酸盐后,即可准确测定NO的生成量。格里斯分析的机理概括为重氮类之间的偶氮耦合,重氮类是由磺胺和 NO2-和 N-(1-萘基)乙二胺二盐酸盐产生的,产物在540nm处有特征吸收峰,测定其吸光值,可以计算NO含量。
酶标仪或可见光分光光度计(能测 540nm处的吸光值)及恒温培养箱
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
去离子水
匀浆器(如果是组织样本)
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小;
2、样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作;
3、杂蛋白多,建议处理目的蛋白;
4、抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体;
5、抗体孵育时间过久,建议减少抗体孵育时间;
6、二抗与抗原有交叉反应,建议选择合适的封闭物;
7、二聚体或多聚体存在,建议增加蛋白质变性过程及强度;
8、底物显色与曝光时间过长,建议缩短显色及曝光的时间。
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