乳酸脱氢酶(LDH)是一种氧化还原酶(EC1.1.1.27),广泛存在于各种生物体中。它催化丙酮酸和乳酸相互转化,同时伴随着NADH 和NAD+的相互转化。在缺氧条件下,它将糖酵解的终产物丙酮酸转化为乳酸。LDH 定量是有临床意义的,因为某些LDH同工酶的血清水平反映了特定组织中的病理条件。当疾病、伤害或有毒物质损害组织时,细胞的乳酸脱氢酶释放到血液中。由于乳酸脱氢酶是一种相当稳定的酶,因此它已被广泛用于评估组织和细胞的损伤和毒性。本试剂盒提供了一种简单、简便的微量法,用于测定动植物组织、细胞、血清(浆)和其他生物液中的乳酸脱氢酶。原理是LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸进一步与 2,4 -二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在碱性溶液中显棕红色,在520 nm 处有大吸收峰。在一定的浓度范围内, 丙酮酸含量与 520 nm 吸光度成正比,根据标准曲线,可计算出样品中丙酮酸含量,进而反映LDH活性。
酶标仪或可见光分光光度计(能测520nm处的吸光度)
恒温箱、制冰机、低温离心机
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
去离子水
匀浆器(如果是组织样本)
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验,尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究,如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途,我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用,并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用;否则,可能导致结果异常。
5. 勤换吸头,避免各组分之间的交叉污染。
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答:如果能够排除下面的几个问题,那么问题多半出现在一抗和抗原制备上。
1、二抗的HRP 活性太强,将底物消耗光;
2、ECL底物中H2O2不稳定,失活;
3、ECL底物没覆盖到相应位置;
4、一抗选择不当;
5、二抗失活。
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