海藻糖酶(Trehalase,THL)(EC 3.2.1.28)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。海藻糖酶主要功能在于生物体分解海藻糖生成葡萄糖而直接用于能量供应。本试剂盒提供了一种简单易用的比色法,用于分析各种生物样品中海藻糖酶的活性。其原理是海藻糖酶催化海藻糖产生葡萄糖,葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并产生过氧化氢;过氧化物酶催化过氧化氢氧化4-氨基安替比林偶联酚,生成有色化合物,在505nm有特征吸收峰。在一定的浓度范围内产生葡萄糖的量与505nm吸光度成线性关系,根据标准曲线即可计算出样品产生葡萄糖的量,以此反映海藻糖酶活性。
酶标仪或可见分光光度计(能测505nm处的吸光度)
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
水浴锅、低温离心机和制冰机
去离子水
匀浆器(如果是组织样本)
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小;
2、样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作;
3、杂蛋白多,建议处理目的蛋白;
4、抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体;
5、抗体孵育时间过久,建议减少抗体孵育时间;
6、二抗与抗原有交叉反应,建议选择合适的封闭物;
7、二聚体或多聚体存在,建议增加蛋白质变性过程及强度;
8、底物显色与曝光时间过长,建议缩短显色及曝光的时间。
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