还原糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。植物体内的还原糖主要包括葡萄糖、果糖和麦芽糖等,其中葡萄糖和果糖不仅是呼吸作用的主要底物,也是进一步合成蔗糖、淀粉和纤维素的底物。本试剂盒可检测各种生物样本中还原糖含量,其原理是在碱性溶液中 3,5-二硝基水杨酸能够被还原糖还原生成棕红色的氨基化合物,在540nm 有特征吸收峰,在一定的浓度范围内,还原糖含量与540nm吸光度成线性关系,根据标准曲线,即可计算出样品中还原糖的含量。
酶标仪或可见分光光度计(能测540nm处的吸光度)以及水浴锅
96孔板或微量玻璃比色皿,可调节式移液枪及枪头
离心机
去离子水
匀浆器(如果是组织样本)
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小;
2、样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作;
3、杂蛋白多,建议处理目的蛋白;
4、抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体;
5、抗体孵育时间过久,建议减少抗体孵育时间;
6、二抗与抗原有交叉反应,建议选择合适的封闭物;
7、二聚体或多聚体存在,建议增加蛋白质变性过程及强度;
8、底物显色与曝光时间过长,建议缩短显色及曝光的时间。
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