β-葡萄糖苷酶(β-D-Glucosidase,EC3.2.1.21),别名纤维二糖酶(cellobias,CB或β-G)、龙胆二糖酶和苦杏仁苷酶。它属于纤维素酶类,是纤维素分解酶系中的重要组成成分,能够催化β-糖苷键水解,同时释放出β-D-葡萄糖和相应的配基。β-GC广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,在植物的种子和微生物中尤为普遍,具有多方面生理作用:在纤维素的糖化作用中,β-GC负责进一步水解纤维素二糖和纤维素寡糖生成葡萄糖;β-GC水解萜烯类香气前驱体,使糖苷键合态变成游离态,从而产生香味。β-GC能够水解植物体内野黑樱苷,释放HCN,从而防止昆虫取食。本试剂盒提供了一种简单易用的比色法,用于分析各种生物样品中β-GC的活性。其原理是β-GC分解对-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者在400nm有大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算β-GC活性。
酶标仪或可见光分光光度计(能测400nm处的吸光度)及水浴锅
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
离心机、制冰机
去离子水
匀浆器(如果是组织样本)
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小;
2、样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作;
3、杂蛋白多,建议处理目的蛋白;
4、抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体;
5、抗体孵育时间过久,建议减少抗体孵育时间;
6、二抗与抗原有交叉反应,建议选择合适的封闭物;
7、二聚体或多聚体存在,建议增加蛋白质变性过程及强度;
8、底物显色与曝光时间过长,建议缩短显色及曝光的时间。
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