糖化酶,即葡萄糖淀粉酶(EC3.2.1.3),又称γ-淀粉酶,是一种外切型糖苷酶,它从淀粉的非还原性末端水解α-1,4糖苷键和α-1,6糖苷键,将淀粉完全水解为葡萄糖,因此广泛的应用于酒精、白酒、抗生素、氨基酸、有机酸,甘油,淀粉糖等工业中,是我国重要的工业酶制剂之一。本试剂盒提供了一种简单易用的比色法,用于分析生物样品中糖化酶的活性。其原理是糖化酶水解可溶性淀粉生成葡萄糖,与3,5-二硝基水杨酸生成红棕色化合物,在540nm处有大光吸收,在一定范围内反应液颜色深浅与葡萄糖的量成正比,可测定葡萄糖的量来计算得糖化酶的活力。
酶标仪或可见分光光度计(能测540nm处的吸光度)
96孔板或微量玻璃比色皿,可调节式移液枪及枪头
制冰机,离心机,水浴锅
去离子水
匀浆器
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小;
2、样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作;
3、杂蛋白多,建议处理目的蛋白;
4、抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体;
5、抗体孵育时间过久,建议减少抗体孵育时间;
6、二抗与抗原有交叉反应,建议选择合适的封闭物;
7、二聚体或多聚体存在,建议增加蛋白质变性过程及强度;
8、底物显色与曝光时间过长,建议缩短显色及曝光的时间。
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