β-1,4-葡聚糖酶/纤维二糖水解酶(C1,EC3.2.1.91)存在于细菌、真菌和动物体内,是纤维素酶系的组份之一,也是水解天然纤维素的必需组分。C1催化多聚糖链的末端非还原端水解β-葡萄糖苷键,每次切下1个纤维二糖分子,释放出纤维二糖和葡萄糖。本试剂盒提供了一种简单易用的比色法,用于分析生物样品中C1的活性。其原理是C1可催化微晶纤维素降解产生还原糖,通过3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖生成速率来计算其酶活性。
酶标仪或可见光分光光度计(能测540nm处的吸光度)及水浴锅
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
离心机、制冰机
去离子水
匀浆器(如果是组织样本)
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小;
2、样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作;
3、杂蛋白多,建议处理目的蛋白;
4、抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体;
5、抗体孵育时间过久,建议减少抗体孵育时间;
6、二抗与抗原有交叉反应,建议选择合适的封闭物;
7、二聚体或多聚体存在,建议增加蛋白质变性过程及强度;
8、底物显色与曝光时间过长,建议缩短显色及曝光的时间。
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