多酚氧化酶(Polyphenol Oxidase, PPO, EC1.10.3.1)主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是一种含铜的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化产生醌,从而引起褐化,与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。本试剂盒提供了一种简单的检测方法,用于检测生物样本,如血浆、血清、果汁、动植物组织、细胞以及细菌样本中多酚氧化酶(PPO)的活性水平。在测定中,样本中的多酚氧化酶(PPO)能够催化邻苯二酚产生醌,后者在525nm有特征光吸收,测定525nm光吸收增加的速率,计算多酚氧化酶(PPO)活性。
酶标仪或可见分光光度计(能测525nm处的吸光度)及水浴锅
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
低温离心机、制冰机
去离子水
匀浆器(如果是组织样本)
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答:可能的原因有:
1、膜没有完全均匀湿透,建议 使用100% methanol浸透膜;
2、洗膜不充分,可以增加洗液体积和洗涤次数;
3、电极不平衡或者加样位置偏斜,可以调整电极和加样;
4、封闭物用量不足,可以提高封闭物浓度,孵育时保证封闭液完全浸没转印膜;
5、封闭物使用不当,比如检测生物素标记的蛋白时不可用脱脂奶粉封闭;
6、封闭时间不够,一般情况下室温37度封闭1小时以上或者4度封闭过夜;
7、抗体非特异性结合,可以降低抗体浓度,减少孵育时间;
8、一抗稀释度不适宜,可以对抗体进行滴度测试,选择适宜的抗体稀释度;
9、一抗孵育的温度偏高,建议4℃结合过夜;
10、抗体浓度过高或洗涤不够,建议降低抗体浓度,增加洗涤次数和时间;
11、化学显色底物过多,建议按说明书加入适量的显色底物。
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