抗氧化剂在防止自由基和其他潜在有毒氧化物质的形成和清除方面发挥着重要作用。抗氧化剂种类分为三类:酶类(GSH还原酶、过氧化氢酶、过氧化物酶等)、小分子类(抗坏血酸、尿酸、GSH、维生素E等)和蛋白质类(白蛋白、转铁蛋白等)。由于氧化应激会导致许多疾病的发展,包括阿尔茨海默病、帕金森病、糖尿病、类风湿性关节炎和神经变性,抗氧化剂在药理学中的应用得到了深入研究。本试剂盒提供了一种简便的比色测定法,用于测定样本中的总抗氧化能力。其原理是在酸性环境下,抗氧化物质还原Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)产生蓝色的Fe2+-TPTZ,在593nm测定Fe2+-TPTZ的含量,即可获得样品中的总抗氧化能力。
酶标仪或可见光分光光度计(能测593nm处的吸光度)
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
低温离心机、制冰机
去离子水
匀浆器(如果是组织样本)
注意:各组分(小管试剂)开盖前,请先低速离心。
液体试剂均为即用型。
阳性对照:加入1mL提取液来溶解,混匀得到母液。然后取0.1mL母液加到0.9mL提取液中混匀。浓度是 0.1mg/mL,4℃保存。
工作液的配制:临用前配制,将试剂一、试剂二、试剂三按 10:1:1 的比例混合,现配现用。
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答:如果能够排除下面的几个问题,那么问题多半出现在一抗和抗原制备上。
1、二抗的HRP 活性太强,将底物消耗光;
2、ECL底物中H2O2不稳定,失活;
3、ECL底物没覆盖到相应位置;
4、一抗选择不当;
5、二抗失活。
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