超氧阴离子(O2-)是通过将电子加到氧上而产生的一种短暂的自由基。它是由紫外线、香烟烟雾,环境污染物和γ辐射等环境因素作用形成的,或者是由黄嘌呤氧化酶或 NADPH氧化酶等氧化酶衍生而来的。O2-一旦形成,就会攻击细胞成分并破坏脂质,蛋白质和DNA。这会引发多种疾病,包括癌症,动脉粥样硬化,类风湿性关节炎,糖尿病,肝损害和中枢神经系统疾病。清除超氧阴离子自由基的研究越来越受到重视。本试剂盒提供了一种简单易用的比色法,用于检测各种生物样本超氧阴离子清除能力。其原理是黄嘌呤氧化酶(XO)催化反应提供了超氧阴离子(O2-)。O2-与WST-8染料反应形成水溶性的有色甲臜产物,可以很容易地进行比色定量。样品清除了O2-,因此用于显色反应的O2-较少。通过比色法在OD450nm下测量样品的这种清除能力。
酶标仪或可见分光光度计(能测450nm处的吸光度)
96孔板或微量玻璃比色皿、移液枪及枪头
恒温培养箱、制冰机、低温离心机
去离子水
匀浆器(如果是组织样本)
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答:可能的原因有:
1、胶浓度不对,不同浓度的胶跑出的蛋白条带的位置可能有所偏差,可以调整浓度;
2、抗体孵育不充分,建议增加抗体浓度,延长孵育时间;
3、酶失活,建议直接将酶和底物进行混合,如果不显色则说明酶失活了。选择在有效期内、有活性的酶联物;
4、目的蛋白存在翻译后修饰或剪切体,建议查询相关文献确定;
5、标本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低,建议设置阳性对照比对结果,增加标本上样量。
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