白蛋白由肝实质细胞合成,在血浆蛋白中含量多,具有重要的生理功能,包括维持胶体渗透压,并可与长链脂肪酸、胆汁酸、胆红素、血红素、钙和镁离子等物质结合。它拥有抗氧化性和抗凝血性,能充当营养物质和药物的运输载体,同时也是血浆PH值的缓冲剂。血清白蛋白含量直接关系到肝脏疾病、肾脏疾病、营养不良或蛋白流失性肠道病症的发生发展,是临床检测的一个重要指标。本试剂盒提供了一种简便的比色测定法,用于测定样本中的白蛋白含量。其原理是白蛋白在pH4.2的缓冲液中带正电荷,可与带负电荷的染料溴甲酚绿结合形成蓝绿色复合物,在波长630nm处有吸收峰,在一定范围内其颜色深浅与白蛋白浓度成正比例。
酶标仪或紫外分光光度计(能测630nm处的吸光度)及恒温箱
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
去离子水
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小;
2、样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作;
3、杂蛋白多,建议处理目的蛋白;
4、抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体;
5、抗体孵育时间过久,建议减少抗体孵育时间;
6、二抗与抗原有交叉反应,建议选择合适的封闭物;
7、二聚体或多聚体存在,建议增加蛋白质变性过程及强度;
8、底物显色与曝光时间过长,建议缩短显色及曝光的时间。
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