
谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS;EC 6.3.1.2)是一种控制氮代谢的酶,主要存在于植物中,是生物体内氨同化的关键酶之一,催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺,不仅可以防止过多的铵离子对生物有毒性,而且谷氨酰胺也是氨的主要储存和运输形式。在高等植物的研究中,GS也常被定义为植物氨同化所必需的酶,人谷氨酰胺合成酶叫做hGS。本试剂盒提供了一种简单的检测方法检测生物样本中谷氨酰胺合成酶(GS)的活性水平。其原理是GS在ATP和Mg2+存在下,催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺;谷氨酰胺进一步转化为γ─谷氨酰基异羟肟酸,在酸性条件下与铁形成的络合物在540nm处有大吸收峰,于540nm测定吸光度,即可计算谷氨酰胺合成酶(GS)活力。



酶标仪或可见分光光度计(能测540nm处的吸光度)及水浴锅
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
恒温箱、低温离心机、制冰机
去离子水
匀浆器(如果是组织样本)
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可能的原因有:
1.仪器校准不当。
2.检测波长设置错误。
3.反应孔中有气泡或杂质。
1)对照的设置对于测定结果的可靠性影响很大,尤其是待测液中含有与测定原理中拟直接检测的产物一样的物质时。通过设置对照,不仅可以排除本底的影响,而且可以排除其它一些未知的复杂影响,保证测定结果可靠。
(2)首先考虑的是保证测定结果可靠。因此,有些试剂盒只设空白对照,但是有些试剂盒每个样品都设对照。其中后者是根据反应原理,为了排除可能的复杂影响。
关于设置样本对照是否造成浪费。首先必须要保证测定结果可靠,因为如果测定结果不可靠,就不可能得到正确结论,那么所有的研究投入,包括前期的样品培养与处理、购买试剂盒的费用和用户的时间与精力,都会浪费。为此,我们精心权衡,在必要时每个样品都设对照。
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