线粒体呼吸链复合体Ⅴ，又称 F1F0-ATP合酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，由F1和F0两个亚单位组成。该酶利用呼吸链产生的质子电化学梯度催化ATP合成，也可逆过程水解ATP。此外，线粒体呼吸链复合体Ⅴ还存在于叶绿体、异养菌和光合细菌中。线粒体呼吸链复合体Ⅴ是线粒体氧化磷酸化和叶绿体光合磷酸化合成ATP的关键酶。本试剂盒提供了一种简单的检测方法，用于检测生物体内线粒体呼吸链复合体Ⅴ活性，其原理是线粒体呼吸链复合体Ⅴ水解ATP产生ADP和Pi，通过测定Pi增加速率来测定线粒体呼吸链复合体Ⅴ活性。
酶标仪或分光光度计（能测660nm处的吸光度）及恒温箱
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
制冰机、低温离心机
去离子水
匀浆器（如果是组织样本）
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答：可能的原因有：
1、目的蛋白有多个修饰位点，本身可以呈现多条带，建议查阅文献或进行生物信息学分析，获得蛋白序列的修饰位点信息，通过去修饰确定蛋白实际大小；
2、样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂；样本处理时在冰上操作；
3、杂蛋白多，建议处理目的蛋白；
4、抗体特异性不强，建议使用特异性强的抗体；
5、抗体孵育时间过久，建议减少抗体孵育时间；
6、二抗与抗原有交叉反应，建议选择合适的封闭物；
7、二聚体或多聚体存在，建议增加蛋白质变性过程及强度；
8、底物显色与曝光时间过长，建议缩短显色及曝光的时间。
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