线粒体呼吸链复合体Ⅴ,又称 F1F0-ATP合酶,广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中,由F1和F0两个亚单位组成。该酶利用呼吸链产生的质子电化学梯度催化ATP合成,也可逆过程水解ATP。此外,线粒体呼吸链复合体Ⅴ还存在于叶绿体、异养菌和光合细菌中。线粒体呼吸链复合体Ⅴ是线粒体氧化磷酸化和叶绿体光合磷酸化合成ATP的关键酶。本试剂盒提供了一种简单的检测方法,用于检测生物体内线粒体呼吸链复合体Ⅴ活性,其原理是线粒体呼吸链复合体Ⅴ水解ATP产生ADP和Pi,通过测定Pi增加速率来测定线粒体呼吸链复合体Ⅴ活性。
酶标仪或分光光度计(能测660nm处的吸光度)及恒温箱
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
制冰机、低温离心机
去离子水
匀浆器
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灵敏度是试剂盒多次检测空白样本计算得到的低检出限,只有样本浓度高于试剂盒的灵敏度时检测具有意义。
试剂盒检测范围是表示当样本浓度在该范围内,其浓度和检测OD值具有良好的线性更新,能够准确定量样本的浓度情况。
生化试剂盒初一般是采用分光光度法,用分光光度计测量吸光度。微量法是随着酶标仪和微孔板的普及,改用酶标仪和酶标板测量吸光度。除了仪器不同以外,主要差别是反应体系更小,一般不超过250ul,计算公式的系数会有一定变化。
d:由比色皿光径,1cm改为96孔板直径,0.5 cm(也有0.6cm的)
但对于标明只用分光光度法的试剂盒,不建议使用酶标仪进行酶活性测定。非要用酶标仪进行检测,一定要按照说明书将反应体系缩小至250微升左右,加样表中各试剂体积一定要按照比例缩小。不过,因为初研发时是按照分光光度法进行设计和调整的,用户改变测定仪器后,我们不保证能够取得好的结果。
普通酶标板是用来测定反应产物的光吸收峰波长在可见光范围的生化试剂盒项目的,无法测量反应产物的光吸收峰波长在紫外区域的项目。可见光是电磁波谱中人眼可以感知的部分,可见光谱没有精确的范围;一般人的眼睛可以感知的电磁波的波长在400~760nm之间,但还有一些人能够感知到波长大约在380~780nm之间的电磁波。可见光通常指波长范围为:390nm-780nm的电磁波。注意:我们看到的其实是反射的光,比如ELISA终止后的黄色,黄光波长为580-595nm,但实际测量的450nm是它的补色。
UV板是紫外板,这些微板有一个独特的紫外线透明底部,是测定反应产物的光吸收峰波长在紫外区域的理想耗材。紫外光被划分为A 射线、B 射线和C 射线(简称UVA、UVB 和UVC),波长范围分别为400-315nm,315-280nm,280-190nm
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