β-羟基丁酸(β-HB;3-羟基丁酸)是酮体(或含有酮基的水溶性分子)的一种,主要在肝脏中由脂肪酸氧化产生,并输出到外周组织,作为能量来源。脂肪酸在肝内正常分解代谢后所产生的酮体,分为乙酰乙酸,β-羟基丁酸和丙酮。这三类物质互相转换,性质大致相同,但代谢途径却不一样。β-HB和乙酰乙酸将能量从肝脏输送到其他组织。β-羟基丁酸占酮体总量的78%,主要存在于血液中。乙酰乙酸占酮体总量的20%,可以由尿液排出,也可转变为丙酮呼出。丙酮占酮体总量的2%,容易挥发,可通过呼吸尿液等排出体外。β-HB可在食物摄入量少、低碳水化合物饮食、高脂肪饮食、饥饿和长期剧烈运动期间产生。β-羟基丁酸的测定在糖尿病酮症的诊断、治疗监测中比乙酰乙酸测定更灵敏,更可靠,同样在糖尿病控制的预告中也非常有价值。本试剂盒提供了一种简单易用的比色法,用于分析各种生物样品中β-HB含量。其原理是β-HB被β-羟丁酸脱氢酶(β-HBDH)氧化,产生乙酰乙酸,伴随这个反应过程,NAD+被还原为NADH,NADH将WST-8还原生成橙黄色formazan(甲臜),在450nm左右检测有大吸收峰。通过测定450nm下吸光度变化来计算β-HB含量。
酶标仪或可见光分光光度计(能测450nm处的吸光度)
恒温箱、制冰机、低温离心机
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
去离子水
匀浆器(如果是组织样本)
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验,尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究,如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途,我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用,并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用;否则,可能导致结果异常。
5. 勤换吸头,避免各组分之间的交叉污染。
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答:可能的原因有:
1、胶浓度不对,不同浓度的胶跑出的蛋白条带的位置可能有所偏差,可以调整浓度;
2、抗体孵育不充分,建议增加抗体浓度,延长孵育时间;
3、酶失活,建议直接将酶和底物进行混合,如果不显色则说明酶失活了。选择在有效期内、有活性的酶联物;
4、目的蛋白存在翻译后修饰或剪切体,建议查询相关文献确定;
5、标本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低,建议设置阳性对照比对结果,增加标本上样量。
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