磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)(EC 4.1.1.31)广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中,是催化磷酸烯醇式丙酮酸与二氧化碳反应生成草酰乙酸呈不可逆反应的酶,对三羧酸循环的运转起重要调节作用。本试剂盒提供了一种简单易用的比色法,用于检测各种生物样本PEPC活性。其原理是磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)催化磷酸烯醇式丙酮酸和CO2生成草酰乙酸和HPO42-,苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和NADH生成苹果酸和NAD+,NADH在340nm有特征吸收峰,而NAD+没有,通过测定340nm光吸收下降速率,即可计算PEPC活性。
酶标仪或紫外分光光度计(能测340nm处的吸光度)及恒温箱
96孔UV板或微量石英比色皿、可调节式移液枪及枪头
低温离心机、制冰机
去离子水
匀浆器(如果是组织样本)
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答:可能的原因有:
1、胶凝的不均匀或聚合不好,建议灌胶前将溶液充分混匀;
2、某些样品盐浓度较高,建议除盐或将样品盐浓度调成一致;
3、缓冲液陈旧,成分改变,可以重配;
4、凝胶下面有气泡,电泳前要先将气泡赶走;
5、电泳时温度过高,可以降低电流或电压;
6、样品中含有不溶性颗粒,建议样品充分搅拌混匀。
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