脯氨酸(PRO)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,逆境条件下,植物体内PRO含量显著增加。脯氨酸是植物体内适应逆境胁迫的一种重要的渗透调节物质。高等植物中脯氨酸代谢因其初始底物不同,分为谷氨酸( Glu) 和鸟氨酸( Orn) 两条合成途径。吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS,Δ1-pyrroline-5-carboxylate synthetase)是以谷氨酸为前体合成脯氨酸途径的关键酶,对植物适应逆境胁迫起关键作用。本试剂盒提供了一种简单的检测方法,用于检测生物体内吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS)活性,其原理是吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS)催化谷氨酸生成吡咯啉-5-羧酸(P5C)过程中分解ATP生成ADP和无机磷,通过钼酸铵比色法测定单位时间内产生无机磷的量来测定P5CS活性。
酶标仪或分光光度计(能测660nm处的吸光度)及恒温箱
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
制冰机、低温离心机
去离子水
匀浆器(如果是组织样本)
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可能原因 解决措施是
1,标准品稀释不正确。 确保标准品按照推荐方法溶解和稀释。
2,移液不准确。 定期校准移液器并检查枪头密封性。
3,反应液蒸发。 用封板膜密封酶标板。
4,洗板不彻底。 足够的洗涤次数和加入足量洗涤液。
5,孔底有异物。 读数前清洁板底。
可能原因 解决措施是
1,试剂反应不充分 确保孵育时间并按推荐温度孵育
2,试剂体积添加不足 检查移液器并严格按照操作步骤操作
3,稀释不正确 检查试剂稀释步骤
4,酶结合物失活 混合酶结合物和底物,通过显色反应检查
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