可能的原因有：

1.仪器校准不当。

2.检测波长设置错误。

3.反应孔中有气泡或杂质。

生化试剂盒初一般是采用分光光度法，用分光光度计测量吸光度。微量法是随着酶标仪和微孔板的普及，改用酶标仪和酶标板测量吸光度。除了仪器不同以外，主要差别是反应体系更小，一般不超过250ul，计算公式的系数会有一定变化。

d：由比色皿光径，1cm改为96孔板直径，0.5 cm（也有0.6cm的）

但对于标明只用分光光度法的试剂盒，不建议使用酶标仪进行酶活性测定。非要用酶标仪进行检测，一定要按照说明书将反应体系缩小至250微升左右，加样表中各试剂体积一定要按照比例缩小。不过，因为初研发时是按照分光光度法进行设计和调整的，用户改变测定仪器后，我们不保证能够取得好的结果。

1）对照的设置对于测定结果的可靠性影响很大，尤其是待测液中含有与测定原理中拟直接检测的产物一样的物质时。通过设置对照，不仅可以排除本底的影响，而且可以排除其它一些未知的复杂影响，保证测定结果可靠。

（2）首先考虑的是保证测定结果可靠。因此，有些试剂盒只设空白对照，但是有些试剂盒每个样品都设对照。其中后者是根据反应原理，为了排除可能的复杂影响。

关于设置样本对照是否造成浪费。首先必须要保证测定结果可靠，因为如果测定结果不可靠，就不可能得到正确结论，那么所有的研究投入，包括前期的样品培养与处理、购买试剂盒的费用和用户的时间与精力，都会浪费。为此，我们精心权衡，在必要时每个样品都设对照。

1. 样品尽可能液氮速冻后保存在-80℃冰箱中，以减少酶活性变化。粗酶液提取全程应该保持低温，包括样品称量应该迅速完成，粗酶液提取应该在冰浴中进行，离心应该在4℃左右进行，测定过程中粗酶液应该保存在冰浴中。此外，粗酶液提取后应该尽快完成测定，通常不可以留到第二天测定。

2. 在对样本进行提取时，加完提取液好不要用液氮研磨，而且样本不要反复冻融，这样会破坏酶的活性。冻融会影响蛋白的三级结构，对酶活性有一定影响，对于动植物组织，可以直接研磨，对于细胞或细菌之类的样品，可以使用超声波。

3. 提取要根据不同样本特点进行，原则是提取充分和保持活性。对于有细胞壁的样品，一定要注意破壁方法；对于分布于特定细胞器中的成分，原则上先分离该细胞器，然后再从收集的细胞器中进一步提取需要的成分。对于存在于膜上的成分，要注意如何分离，去垢剂的使用要小心，以避免酶失活。使用超声波破碎，一定要防止温度升高导致失活。特殊样品可以查阅相关文献，参考前人提取方法，或者咨询我们的研发专家。