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Western Blot(WB)实验中胶片是一片空白,是怎么回事?
答:如果能够排除下面的几个问题,那么问题多半出现在一抗和抗原制备上。
1、二抗的HRP 活性太强,将底物消耗光;
2、ECL底物中H2O2不稳定,失活;
3、ECL底物没覆盖到相应位置;
4、一抗选择不当;
5、二抗失活。
脂多糖Lipopolysaccharides (LPS)是革兰氏阴性细菌细胞壁中的一种特有成分,位于细胞壁的外层并暴露于非 荚膜细菌的细胞表面,有利于维持细胞外膜的完整性,保护细菌免受胆汁盐和脂类抗生素的破坏。结构上,脂多糖由类脂 A、核心多糖和 O-多糖侧链组成。其中类脂质A是构成细菌内毒素的主要成分,决定其毒性强弱;而 O-多糖侧链在不同细菌间是高度变化的,特异性决定细菌的血清型。
1.LPS 储存液的配制,细胞培养相关实验中,将 1mg LPS 重悬于 1 mL 无菌平衡盐溶液或 细胞培养基,轻轻旋涡振荡直至粉末完全溶解,即得到 1 mg/mL 的储存液。此储存液可进 一步用无菌平衡盐或细胞培养基稀释至需要的工作浓度。
2. LPS 储存液的保存:本储存液(1 mg/mL)可放在 4 ℃保存,约一个月稳定;也可分装 成单次用量后放到-20 ℃,2 年稳定。避免反复冻融。
1、LPS 溶液应储存于硅烷化容器内,因为 LPS 可吸附于塑料或某些玻璃器皿,尤其当其浓 度<0.1 mg/mL 时;但当 LPS 浓度大于 1 mg/mL 时,上述吸附则可忽略不计;
2、如使用玻璃器皿,则需旋涡振荡 LPS 溶液至少 30 min,以重溶被吸附溶;
3、本产品仅供科研使用,请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途
4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
更新中...
答:如果能够排除下面的几个问题,那么问题多半出现在一抗和抗原制备上。
1、二抗的HRP 活性太强,将底物消耗光;
2、ECL底物中H2O2不稳定,失活;
3、ECL底物没覆盖到相应位置;
4、一抗选择不当;
5、二抗失活。
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