答：可能的原因有：

1、胶凝的不均匀或聚合不好，建议灌胶前将溶液充分混匀；

2、某些样品盐浓度较高，建议除盐或将样品盐浓度调成一致；

3、缓冲液陈旧，成分改变,可以重配；

4、凝胶下面有气泡,电泳前要先将气泡赶走；

5、电泳时温度过高，可以降低电流或电压；

6、样品中含有不溶性颗粒，建议样品充分搅拌混匀。

答：可能的原因有：

1、胶浓度不对，不同浓度的胶跑出的蛋白条带的位置可能有所偏差，可以调整浓度；

2、抗体孵育不充分,建议增加抗体浓度，延长孵育时间；

3、酶失活，建议直接将酶和底物进行混合，如果不显色则说明酶失活了。选择在有效期内、有活性的酶联物；

4、目的蛋白存在翻译后修饰或剪切体，建议查询相关文献确定；

5、标本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低，建议设置阳性对照比对结果，增加标本上样量。

答：可能的原因有：

1、目的蛋白有多个修饰位点，本身可以呈现多条带，建议查阅文献或进行生物信息学分析，获得蛋白序列的修饰位点信息，通过去修饰确定蛋白实际大小；

2、样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂；样本处理时在冰上操作；

3、杂蛋白多，建议处理目的蛋白；

4、抗体特异性不强，建议使用特异性强的抗体；

5、抗体孵育时间过久，建议减少抗体孵育时间；

6、二抗与抗原有交叉反应，建议选择合适的封闭物；

7、二聚体或多聚体存在，建议增加蛋白质变性过程及强度；

8、底物显色与曝光时间过长，建议缩短显色及曝光的时间。