过硫酸铵(Ammonium persulfate,AP或APS)分子式为(NH4)2S2O8,分子量为228.20,纯度>98%,用于配制PAGE胶等。过硫酸铵溶液(AP,10%)在室温下不稳定,4℃可以保存1周,-20℃可以保存3个月。
1、 配制好的10%过硫酸铵在室温下不稳定,-20℃可以保存3个月。
2、 注意避免反复冻融,可先分装成小分,使用一次即丢弃。
3、 另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切,可通过适当调节APS的用量,控制在不同的环境下凝胶凝聚的速度。
4、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小;
2、样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作;
3、杂蛋白多,建议处理目的蛋白;
4、抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体;
5、抗体孵育时间过久,建议减少抗体孵育时间;
6、二抗与抗原有交叉反应,建议选择合适的封闭物;
7、二聚体或多聚体存在,建议增加蛋白质变性过程及强度;
8、底物显色与曝光时间过长,建议缩短显色及曝光的时间。
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