本试剂盒提供了简单又快速的SDS-PAGE彩色(红色)凝胶配制试剂,采用上层胶(也称浓缩胶、积层胶)和下层胶(也称分离胶)的经典配方,加入改良型促凝剂即可快速制备凝胶,避免的传统制胶法中TEMED的恶臭味,保护了实验人员的身体健康。本试剂盒中把凝胶配制所需的缓冲试剂、SDS等预混合成下层胶缓冲液(4X)和上层胶缓冲液(4X),简化了凝胶配制的步骤。下层胶缓冲液中含Tris-HCl(pH8.8)及适量SDS,上层彩胶缓冲液中含Tris-HCl(pH6.8)及适量SDS和彩色(红色)染料。本试剂盒配制出的浓缩胶为彩色(红色),点样孔清晰易辨,呈现实现了加样过程的可视化,极大的提高了加样效率,有利于点样和控制电泳进程。本产品上层胶中的(红色)染料可在上层胶中稳定存在,不会随着电泳而迁移至下层胶,不会影响电泳和蛋白染色效果,电泳完成后也便于识别上层胶并切除,不影响后续Western Blot等实验。
本产品的改良型促凝剂具有更好的稳定性和催化效能,配制过程中无需额外添加TEMED。为确保实验效果和方便吸取使用,已开盖使用过的改良型促凝剂可置于4°C保存至少3个月。
本试剂盒可制备厚度0.75mm常规尺寸凝胶100块,具体配制的凝胶块数量与凝胶的厚薄以及大小有关。
1. 请尽量使用新鲜配制的电泳缓冲液。
2. 配制下层胶(分离胶)后注入制胶玻璃板中,可在凝胶液面的上方加入适量醇(如乙醇、异丙醇等)覆盖于下层胶之上,可加快凝胶凝结速度并使得制出的下层胶液面更加平整。
3. 改良型促凝剂的使用量仅作参考,实际用量可根据个人实验习惯和经验调整,加入较多量的促凝剂可加速凝胶,反之亦然。
4. 凝胶速度与温度有显著的正相关性。同等条件下,温度越高,凝胶速度越快,室温过高时建议适当减小改良型促凝剂的用量,室温较低时,可适当延长凝胶时间。
5. 本产品已加入适量TEMED的替代品,如需进一步加速凝胶,临配胶前可按需补充适量TEMED。
6. 在配胶之前,使胶溶液及缓冲液平衡到室温(如室温放置几分钟),可有效避免凝胶中气泡的形成。由于染料的特殊理化性质,使用前请轻轻上下颠倒混匀。
7. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
8. 本产品仅限于专业人员的科学研究使用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小;
2、样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作;
3、杂蛋白多,建议处理目的蛋白;
4、抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体;
5、抗体孵育时间过久,建议减少抗体孵育时间;
6、二抗与抗原有交叉反应,建议选择合适的封闭物;
7、二聚体或多聚体存在,建议增加蛋白质变性过程及强度;
8、底物显色与曝光时间过长,建议缩短显色及曝光的时间。
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