本试剂盒提供了简单又快速的免染10%SDS-PAGE 彩色(红色)凝胶配制试剂，采用上层胶(也称浓缩胶、积层胶)和下层胶(也称分离胶)的预混配方，只需加入改良型促凝剂即可快速制备凝胶， 避免的传统制胶法中TEMED的恶臭味，保护了实验人员的身体健康，可在短时间内制备多块凝胶，无需计算所需溶液量，无需稀释，操作简便，无需压胶操作。且使用本产品所配置的上层胶带有颜色(红色)，使得蛋白点样孔清晰呈现，实现了加样过程的可视化，极大的提高了加样效率，有利于点样和控制电泳进程。本产品上层胶中的(红色)染料可在上层胶中稳定存在，不会随着电泳而迁移至下层胶，不会影响电泳和蛋白染色效果， 电泳完成后也便于识别上层胶并切除。本产品所制备的凝胶为免染PAGE胶，蛋白条带紫外曝光即可成像，无需染胶，也不影响后续Western Blot等实验。

本产品的改良型促凝剂具有更好的稳定性和催化效能，配制过程中无需额外添加 TEMED。为确保实验效果和方便吸取使用， 已开盖使用过的改良型促凝剂可置于 4°C 保存至少 3 个月。

本试剂盒可制备厚度 0.75mm 常规尺寸的凝胶50 块，具体配制的凝胶块数量与凝胶的厚薄以及凝胶大小有关。

(以一块 0.75/1.0/1.5mm 的 mini 胶为例)

1.   取等体积下层胶溶液和下层胶缓冲液冲液，各 2.0/2.7/4.0mL,轻轻混匀。

2.   向步骤 1的混合溶液中加入 40/60/80μl 的改良型促凝剂，轻轻混匀。

3.   将步骤 2的混合溶液注入制胶玻璃板中，使液面和短玻璃板上沿之间的距离比梳齿长 0.5cm 即可。

4.   取等体积上层胶溶液和彩色上层胶缓冲液，各 0.5/0.75/1.0mL,轻轻混匀。(由于染料的特殊理化性质，使用前请摇匀)

5.   向步骤4 的混合溶液中加入10/15/20μl的改良型促凝剂，轻轻混匀。

6.   灌制完下层胶，无需压胶，无需等待下层胶凝固，立即在下层胶液上面，缓慢将步骤5 的混合溶液注入制胶玻璃板中，注意请勿过快，否则会冲散下层胶液面，灌满后插入梳子待凝固（约15min）

7.   待凝胶全部凝固后，拔去梳齿即可进行后续电泳试验。

8.   电泳结束后，即可将凝胶从玻璃板中取出，放入成像仪紫外(波长 302nm)曝光成像，或在紫外切胶台上直接观察。 (注意：紫外激发荧光基团一般需1-5min，凝胶上即可呈现清晰的蛋白条带。观察Western Blot转印后膜上蛋白条带，必须在电泳后，将凝胶经紫外激发出现清晰条带后，再进行转膜操作。若直接转膜再用紫外激发，荧光信号会很弱或无信号。)

1. 请尽量使用新鲜配制的电泳缓冲液。

2. 本产品制备出的上层胶和下层胶与传统的浓缩胶和分离胶配方一致，针对20-100kDa的蛋白都能有很好的浓缩和分离效果，如果针对更小分子量的蛋白，建议选用普美的12.5%一步法免染SDS-PAGE彩色凝胶快速配制试剂盒(PMK1015D)效果更好；针对更大分子量的蛋白，建议选用普美的8%一步法免染SDS-PAGE彩色凝胶快速配制试剂盒(PMK1016D)效果更好。

3. 灌注上层胶溶液一定要轻缓，避免将上层胶溶液冲入下层胶，上层胶溶液注入后，轻轻振动制胶架，即可使上下层胶分界线平齐。胶凝固后上下层胶分界线平整度略弱于传统方法配的胶，但对后续电泳没有影响。

4. 改良型促凝剂的使用量仅作参考，实际用量可根据个人实验习惯和经验调整，加入较多量的促凝剂可加速凝胶，反之亦然。

5. 凝胶速度与温度有显著的正相关性。同等条件下，温度越高，凝胶速度越快，室温过高时建议适当减小改良型促凝剂的用量，室温较低时，可适当延长凝胶时间。

6. 本产品已加入适量 TEMED 的替代品，如需进一步加速凝胶，临配胶前可按需补充适量 TEMED。

7. 在配胶之前，使胶溶液及缓冲液平衡到室温(如室温放置几分钟)，可有效避免凝胶中气泡的形成。

8. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

9. 本产品仅限于专业人员的科学研究使用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。