彩色预染蛋白 Marker(2.7-40kDa)包含了从2.7kDa到40kDa共9种高度纯化并预染的重组蛋白质(2.7,4.2,6.5,10,15, 20,25,30,40kDa) ,其中40kDa条带为橙红色,10kDa为绿色,其余条带为蓝色。本产品预染蛋白表观分子量经过 thermo26632非预染蛋白质分子量标准标定,适合作为 SDS-PAGE和 Western的蛋白质分子量标准,可用于监测电泳过程中蛋白分离效果,检验 Western转膜(PVDF 、尼龙膜或 NC膜)效果,判断蛋白的分子量大小。
本彩色预染蛋白Marker已经配制在1x SDS-PAGE上样缓冲液中,可直接上样使用,不需要煮沸、稀释和加入还原剂处理。根据上样孔大小,本彩色预染蛋白质分子量标准通常每次上样5-10ul(5×1.5mm胶孔5ul足够),即可在电泳时、电泳后和转膜后观察到非常清楚的蛋白条带。
62.5mM Tris-H3PO4(pH7.5) ,2mM EDTA ,2% (W/V)SDS ,33% (W/V) Glycerol ,5mM DTT, 0.02% (V/V) proclin300。
(1) 室温下解冻后完全溶解并轻轻充分混匀后使用,不要煮沸;
(2) 取本产品5ul与实验样品同时进行聚丙烯酰胺凝胶电泳;建议有条件的实验室在初次使用本产品时可以根 据自身的实验条件和实验习惯通过预实验确定合适的上样量,这样可以节约成本,同时获得效果更佳的实验图片;
(3) 未使用的彩色预染蛋白Marker保存于储存条件,在 4℃可放置 2 个月。
(1) 为避免反复冻融及污染,可将本产品分装后,-20℃保存。
(2) 电泳时间不宜过长,长时间可能导致蛋白条带出现弥散现象,低分子量蛋白可能会泳动出蛋白胶前沿。
(3) Western blot时需要注意小分子特殊性,特别对于小于3kDa的条带,容易穿膜而过。另外建议转膜液不添加SDS,若实验必须使用,建议SDS浓度不要超过0.02-0.04%。
(4) 预染蛋白质在不同的缓冲体系下有不同的表观分子量,可在该缓冲体系中事先用非预染蛋白质分子量标准校正,并按校正后的结果正常使用。
(5) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
(6) 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小;
2、样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作;
3、杂蛋白多,建议处理目的蛋白;
4、抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体;
5、抗体孵育时间过久,建议减少抗体孵育时间;
6、二抗与抗原有交叉反应,建议选择合适的封闭物;
7、二聚体或多聚体存在,建议增加蛋白质变性过程及强度;
8、底物显色与曝光时间过长,建议缩短显色及曝光的时间。
答:可能的原因有:
1、胶凝的不均匀或聚合不好,建议灌胶前将溶液充分混匀;
2、某些样品盐浓度较高,建议除盐或将样品盐浓度调成一致;
3、缓冲液陈旧,成分改变,可以重配;
4、凝胶下面有气泡,电泳前要先将气泡赶走;
5、电泳时温度过高,可以降低电流或电压;
6、样品中含有不溶性颗粒,建议样品充分搅拌混匀。
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