普美克生产的超敏ECL Plus发光底物检测试剂盒用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶（HRP）的抗体及其关联的抗原。其原理是，蛋白质或核酸在电泳后转移到印迹膜上，以一抗及HRP标记的二抗结合膜上的目的蛋白，或以HRP标记的探针直接或间接结合膜上的核酸。洗膜后用本产品配制的ECL工作液，室温孵育膜数分钟，将印迹膜用保鲜膜包被粘贴固定于X光片曝光暗盒。然后转入暗室将X光胶片压在膜上曝光数秒到数小时，显影定影后蛋白质或核酸条带可清晰显示在X光胶片上。

本产品采用独特的发光底物系统，降低曝光背景的同时引入新型的氧化剂，大大提高试剂盒的稳定性，使其在4℃避光能稳定放置一年。本产品配制的ECL工作液衰减较慢，15min内荧光几无减弱，检测时产生的非特异背景非常低，也可节省抗体和待测样品的用量，该试剂可用于PVDF膜和NC膜(硝酸纤维素膜)的Western blot免疫印迹等印迹发光显色。除用于X光胶片，还可直接使用荧光CCD扫描。

1. 执行常规电泳、转膜、HRP标记抗体或者HRP标记核酸探针孵育、洗膜。ECL发光底物是HRP的显色底物，因此检测系统终必须基于HRP酶标记抗体或者核酸探针。

2. 后一次洗膜的同时，新鲜配制发光工作液：分别取等体积的A液和B液1：1混合，混匀后室温放置备用。取A液和B液一定要用不同的枪头，另建议工作液现配现用。（100~200μl发光工作液/cm2膜）

3. 用平头镊取出膜，膜的下缘轻触在滤纸上除去多余洗液（勿使膜完全干燥）。将膜完全浸入发光工作液中，与发光工作液充分接触。室温孵育1-3分钟，准备立即压片曝光。孵育时间过长不会增加灵敏度，有时还会导致曝光条带异常。发光过程的本质是酶促反应，使用过少的发光工作液不利反应进行，也会导致膜上条带曝光不均和明显降低灵敏度。为达节约目的可将膜剪小，但勿降低发光液使用比例。

4. 用平头镊子夹起膜，膜的下缘轻轻接触吸水纸，去除膜上多余液体，留少量工作液，不可让膜完全干燥。

5.将膜迅速放在两片洁净的保鲜膜中间，去除气泡和皱褶，用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖印迹膜的保鲜膜固定在暗盒内，蛋白带面向上。

6. 暗房内取一张X光胶片至于包裹的膜上压片，分别曝光不同的时间，如数秒到数分钟，显影定影冲洗。曝

光时间需根据曝光强度做相应调整。若是背景过高，可使用两张X光胶片同时压片。亦可采用荧光成像仪检

测，将膜放置到荧光成像仪内，按仪器说明书进行检测。