苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合染色，简称HE染色，是病理学常规制片中基本的染色方法，应用极其广泛。苏木精是从原产中南美的洋苏木中提取出来的浅黄褐色的结晶，是一种碱性染色剂，它在被氧化后生成苏木素，同媒染剂(常用的是三价的铝或盐铁)一起使用，能够使细胞核染色。在病理诊断、教学和科研工作中，常用HE染色对正常组织和病变组织进行形态结构观察。对于确定或鉴别病变组织、细胞中出现的某些异常物质与特殊成分，而需要采用的特殊染色方法、酶组织化学方法、免疫组织化学方法等也均是在观察HE染色组织切片的基础上进行的。在HE染色的组织切片中，细胞核呈蓝色，细胞浆呈红色，二者形成鲜明的对比，易于观察分析。

苏木素伊红染色液中，苏木素染色液采用自主研发的配方，由进口的高纯度苏木精、氧化剂等组成，不含氧化汞、甲醇等有害物质，对细胞核染色效果好。其特点是不易产生沉淀和金属; 应用范围广，可以用于人、动物、畜牧、水产等领域，可以用于组织石蜡切片、冰冻切片和组织细胞的染色等；苏木素染色液可以重复使用。

1、实验前准备 自备苏木素分化液（推荐 PMK0555）、苏木素返蓝液（推荐 PMK0556）、二甲苯、梯度乙醇、中性树胶等。 

2、样本前处理 

(1) 对于石蜡切片：切片依次经二甲苯脱蜡 10 min，更换新鲜的二甲苯脱蜡 10 min，无水乙醇 5min，新 鲜无水乙醇 5 min，90%乙醇 5 min，75%乙醇 5 min，自来水洗。 

(2) 对于冰冻切片：-20℃保存的冰冻切片需静置 5-10 min 恢复至室温。如需固定，则经所需固定液室温 后自来水洗。 

3、HE 染色 

(1) 苏木素染色：上述处理好的切片，进入苏木素染液染色 3-5 min，自来水洗； 

(2) 分化：切片经苏木素分化液 2-5 s，自来水流水充分冲洗； 

(3) 返蓝：苏木素返蓝液返蓝 2-5 s，自来水流水充分冲洗；

(4) 伊红染色：切片依次经 85%、95%梯度乙醇脱水，各 5 min。然后进入伊红染液(醇溶)中染色 5 min，经 两次无水乙醇脱水各 5 min； 

(5) 透明：切片再经新鲜无水乙醇脱水 5 min，二甲苯透明 5 min，更换新鲜的二甲苯再透明 5 min。 

(6) 封片：滴加中性树胶进行封片。

1.染色后用苏木素分化液将组织中过多结合的染液脱去。在 HE 染色种常用低浓度盐酸作为分化液，因为酸 能破坏苏木素的醌型结构结构，使色素与组织分离而褪色。组织在经苏木素染色后，必须经过分化去除组织 中过多结合及非特异性吸附的染料，才能进行伊红染色，确保细胞核与胞浆显色分明。可使用 PMK0555 苏木 素分化液。分化过程中，根据组织切片厚度、组织类型等结合镜下观察适当调整分化时间。

2.HE 染色中苏木素染色后的返蓝很重要。苏木素在酸性条件下为离子状态，呈红色；在碱性条件下呈 蓝色。组织切片经酸性分化液分化后呈红色或粉红色，需立即水洗终止分化，再用弱碱性溶液使苏木素，这个过程就是返蓝作用。如果没有专用的返蓝液，用温水浸洗也能使细胞核返蓝，只是所需时间 略长。推荐 PMK0556 苏木素返蓝液。

3.苏木素及伊红染色程度可以根据染色需要进行调整染色时间。

4.苏木素染液可重复使用多次，每次用完后需密封保存，防止有效成分挥发。当组织或细胞着色明显偏 浅或颜色异常时请更换新的染液。

5.用于染色后脱水的无水乙醇纯度需大于 99.9%。如果乙醇含水，伊红会褪色导致染色不均匀。

6. 伊红染液(醇溶)可反复使用数次，用完后注意密封保存，防止有效成分挥发。当组织着色明显偏浅时 建议更换新的染液。 

7.切片脱蜡应尽量干净。系列乙醇应经常更换新液。 8.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。