5% BSA封闭液适用于Western Blot、ELISA以及免疫组化实验中非特异性蛋白结合位点的封闭。封闭后，可以减小后续的一抗或二抗等和载体的非特异性结合，降低背景，增强信噪比，以达到理想的显色效果。
5% BSA封闭液为即用型，无需稀释。封闭步骤中加入足够量的BSA封闭液充分覆盖载体表面，振荡封闭，封闭时间依据实验而定，一般室温封闭半小时至1小时，然后进行抗体孵育等后续操作。
通常在室温封闭60分钟即可。对于一些背景非常高的抗体，可以4℃封闭过夜。
1.Zhou W ,Li X ,Yang X , et al.The In Vitro Promoting Angiogenesis Roles of Exosomes Derived from the Protoscoleces of Echinococcus multilocularis.[J].Journal of microbiology and biotechnology,2024,34(7):11-10. (IF 2.5)
2.Zhoujia H ,Wei Z ,Lin H , et al.Kaempferol exerts antioxidant effects in age-related diminished ovarian reserve by regulating the HSP90/NRF2 pathway.[J].Chemical biology & drug design,2023,103(1): (IF 3)
答：可能的原因有：
1、目的蛋白有多个修饰位点，本身可以呈现多条带，建议查阅文献或进行生物信息学分析，获得蛋白序列的修饰位点信息，通过去修饰确定蛋白实际大小；
2、样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂；样本处理时在冰上操作；
3、杂蛋白多，建议处理目的蛋白；
4、抗体特异性不强，建议使用特异性强的抗体；
5、抗体孵育时间过久，建议减少抗体孵育时间；
6、二抗与抗原有交叉反应，建议选择合适的封闭物；
7、二聚体或多聚体存在，建议增加蛋白质变性过程及强度；
8、底物显色与曝光时间过长，建议缩短显色及曝光的时间。
Copyright ©湖北普美生物科技有限公司 All Rights Reserved. 工信部备案：鄂ICP备17001029号-1 技术支持：武汉微盟
