固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构,固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变,从而使酶失活。固定剂对细胞核细胞外成分发生物理改变。固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等,较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。
福尔马林固定液(10%)主要由甲醛、去离子水组成,该固定液适合于绝大多数组织的固定。
1、按实验具体要求操作。一般标本固定时间控制在1~4h,大标本应适当延长固定时间。
2、固定好的组织,可在福尔马林固定液(10%)或70%乙醇中长期保存。
福尔马林固定液(10%)有一定刺激性和腐蚀性,请在通风较好的环境下操作, 避免吸入。
固定液pH好接近用中性,pH范围6~8。
组织取材的厚度不同,固定时间也不同。常规活检组织比较适合的厚度为2~4mm,一般不超过6mm。对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。
固定液的容量应足够,一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。如果容积不够大,可以在固定期间更换1~3次固定液。
温度对固定的影响很明显,提高温度可以加速固定作用,但温度不宜过高。
取出新鲜组织后,应及时固定,无法及时固定时,应保存于生理盐水中及时送检。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
更新中...
答:可能的原因有:
1、IHC实验一抗和二抗不兼容;
2、没有足够的一抗与目的蛋白结合;
3、抗体可能不适用于IHC,因为其可能无法识别蛋白的天然(3D)形式;
4、一抗/二抗/信号放大试剂盒可能因储存不当、稀释不当或多次反复冻融而失去活性;
5、该蛋白不存在于目标组织中;
6、目的蛋白在组织中含量并不丰富;
7、二抗未避光保存(进行荧光检测时);
8、脱蜡可能不充分;
9、固定步骤可能会改变抗体识别的抗原表位;
10、抗体不能穿透蛋白所定位的细胞核(核蛋白);
11、PBS缓冲液被细菌污染,细菌会破坏目的蛋白上的磷酸基团(磷酸化蛋白);
12、抗原修复不全,对于甲醛固定的组织必须用充分抗原修复来打开抗原表位,以利于与抗体结合。
Copyright ©湖北普美生物科技有限公司 All Rights Reserved. 工信部备案:鄂ICP备17001029号-1 技术支持:武汉微盟