线粒体是一种双膜结合的细胞器，存在于大多数真核细胞中。线粒体的功能是提供细胞能量，此外，线粒体参与信号传递、细胞分化和细胞死亡，以及维持对细胞周期和细胞生长的控制。线粒体与多种人类疾病有关，包括线粒体疾病、心力衰竭和自闭症。线粒体可能在这些过程中发挥重要作用。本试剂盒利用差速离心，能够从动物组织和细胞中快速粗略提取完整的线粒体。这种粗略提取的线粒体通常足以应用于大多数研究，如线粒体呼吸链、线粒体膜电位、细胞凋亡、mtDNA和mtRNA 以及线粒体蛋白组等。

涡旋仪、离心管、细胞刮刀

可调节式移液枪及枪头

磷酸盐缓冲液(PBS)

匀浆器

试剂一：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

试剂二：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

试剂三：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。

注意：所有的实验步骤需在 2-8℃进行。使用预冷的缓冲液和设备。确保所有的溶液是解冻和均匀的。

1. 准确称取0.1g组织或收集500万个细胞，用冷PBS清洗2次；

2. 加入1mL试剂一和10µL 试剂三，冰浴匀浆；

3. 匀浆液600g，4℃离心 5min，收集上清液至另一新的离心管中，舍弃沉淀；

4. 再次离心上清，11,000g，4℃离心 10min；

注意：要获得更加纯化的线粒体，并减少50%以上的溶酶体和过氧化物酶体污染物，可将该步骤更改为 3,000g 4℃离心15min。上清液是细胞质部分。

5. 移除上清液，然后将沉淀重悬于1mL试剂一中。重复步骤3和4。

6. 在沉淀（纯化的线粒体）中加入200µL试剂二和2µL试剂三，充分重悬沉淀。分装并冷冻存储在-80℃中直至使用。