本产品适用于从大肠杆菌等细菌中提取高纯度的质粒DNA，利用经典的碱裂解法，使用了高载量的硅基提取柱，具有操作简单，耗时短以及质粒得率高等优点。
本试剂盒提取的质粒可用于下游的酶切、PCR扩增、DNA测序、转化、体外转录翻译等，但不能直接用于细胞转染。如需转染级质粒DNA，请使用本公司的无内毒素质粒提取试剂盒(PM0105)。

准备工作：次使用时，在Buffer P1中加入1/100体积的RNase A，之后于2-8℃保存。在Buffer PE中加入相应体积的乙醇。
1. 取4-6ml菌液，12000 rpm离心5min收集菌体。
2. 加入250μl Buffer P1，吹打重悬菌体。
3. 加入250μl Buffer P2，盖上离心管盖，上下颠倒4-6次。(此时细菌悬液会变澄清)
4. 加入350μl Buffer N3，上下剧烈颠倒4-6次。(此步会出现白色絮状沉淀)
5. 12000 rpm 离心10min。(如上清液中仍有细菌碎片，可再次离心)
6. 将提取柱置于收集管中，小心吸取上清液(尽量不要吸到沉淀物)加入到提取柱中，离心1min，然后弃去收集管中的液体。
7. 可选步骤：将提取柱重新放在收集管中，在提取柱加入500μl Buffer PB，离心1min，弃去收集管中的液体。(E.coli JM109、BL21HB101、ET12567等endA+宿主菌推荐此步骤，有利于降低质粒中蛋白质残留。E.coli 5α、TOP10等endA-宿主菌此步可省略。)
8. 加入750μl Buffer PE，离心30s，弃去接收管中的液体。
9. 将提取柱重新放在收集管中，再次离心1min。
10. 将提取柱置于干净的1.5ml离心管中，在提取柱中加入40-60μl Buffer EB或水(尽量滴加在膜中央)，静置1min，之后 12000rpm 离心1min。(Buffer EB 或水可事先在60℃水浴预热，以增加洗脱效率。)

1、产品(除添加RNase A后的Buffer P1)可在15-25℃条件下保存15个月以上。添加RNase A后的Buffer P1在2-8℃条件下可稳定保存6个月以上。
2、次使用时请按照试剂瓶上说明在Buffer PE中加入乙醇。
3、Buffer P2和Buffer N3含有SDS等成分，在低温下出现结晶属正常现象，如出现混浊或结晶，在37℃孵育5-10min即可恢复澄清，不影响使用。实验过程中请戴手套，请勿用手直接接触Buffer P2和Buffer N3。
4、高拷贝质粒(如pUC、pET系列)的得率高可达30ug以上。中低拷贝质粒得率在3-20ug之间。
5、对于低拷贝(如pACYC、pSC101衍生质粒)或大质粒(>10kb)提取，应加大起始菌量，使用5-10ml过夜培养物，同时按照比例增加 Buffer P1、P2、N3的使用量。
6、Buffer EB可在使用前在60℃水浴预热，以增加洗脱效率。
7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
8、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。