rizol总RNA提取试剂盒是本公司自主研发和生产的用于细胞或组织的总 RNA提取试剂。Trizol含酚和异硫氰酸胍等物质，具有极强的裂解能力，可在短时间内裂解细胞和组织样本，并有效抑制RNase活性，从而有效防止RNA在提取过程中的降解，保证RNA的完整性。同时本产品使用氯仿替代物替代氯仿，毒性小，操作更安全。加入氯仿替代物离心后，溶液形成上清层为水相(无色) 、中间层、下层为有机相 ，上清层用异丙醇沉淀回收总 RNA ，中间层用乙醇沉淀回收 DNA ，下层用异丙醇沉淀回收蛋白。

本产品适用于次生代谢较少的植物组织(如幼苗、幼叶等)、培养细胞、动物组织、微生物。提取过程可在1h内完成，提取的总 RNA纯度高、完整性好，大限度的去除了蛋白质和基因组DNA等杂质，可以直接用于RT-PCR、Northern Blot、体外翻译及mRNA纯化等实验。

本产品安全性高：使用氯仿替代物替代氯仿，毒性较小；适用范围广；操作简单省时，整个过程可在1h内完成；提取的RNA纯度高、污染少。

1. 自备试剂RNase 、无水乙醇、异丙醇、DEPC处理水等。

2.   细胞裂解或组织匀浆。

(1) 贴壁细胞：吸尽培养液，每10cm2细胞加入1ml Trizol。一般6 孔板每孔加1ml，12孔板每孔加 0.5ml，晃动 3-5下，再用枪吹打2-3下，确保全部裂解，然后吸至离心管中。

(2) 悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，每5x106~ 107动植物或酵母细胞或每107细菌细胞加入1ml Trizol。用枪吹打或适当涡旋振荡，确保全部裂解。某些酵母和细菌如裂解不充分，可用匀浆器匀浆，确保全部裂解。

(3) 植物组织：植物叶片直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨成粉末，每50-100mg植物叶片加入1ml Trizol。

注：经典模式植物如拟南芥、烟草、小麦、玉米等植物叶片能很好地提取RNA；但一些多糖多酚植物，如西红柿、棉花、毛白杨等，不能使用Trizol提取 RNA。

(4) 动物组织：按10-30mg组织加入1ml Trizol，用电动匀浆器或者一次性研磨杵充分匀浆。

2. 对于某些蛋白，多糖或脂含量很高的细胞或组织，Trizol裂解后可能会有不溶物或油脂状漂浮物。需12,000g，4℃离心10分钟，然后吸取澄清的裂解产物至一新的离心管中。

3. 室温放置 5 分钟，使样品充分裂解。

4. 每毫升Trizol加0.1ml氯仿替代物，涡旋震荡混匀或猛烈晃动15 秒，室温放置 2-3 分钟。

5. 12000g，4℃离心15分钟，吸取含总RNA的上层无色水相至一新的离心管中，每毫升Trizol约可吸取0.5-0.55ml。

6. 加入与上清等体积的预冷异丙醇，颠倒数次混匀，室温沉淀 10 分钟。如果希望提取microRNA等小 RNA，推荐-70℃沉淀过夜。

7. 12,000g，4℃离心10分钟，在管底可见RNA沉淀，弃上清。

8. 每毫升初的Trizol加入1ml 75%乙醇(DEPC水配制)，涡旋震荡或颠倒混匀。

9. 7,500g 4℃离心5分钟，弃上清。再用离心机甩一下(>5,000rpm, 离心1 秒)，小心吸尽液体。

10. 待RNA晾干后，加入20-50ul DEPC水溶解，-70℃冻存。注意：切勿让RNA过分干燥，否则将极难溶解，且测出的A260/280值会低于1.6。

11. 分析与定量(选做)

①测定样品在260nm和280nm的吸收值确定 RNA 的质量，按1OD=40pgRNA 计算RNA的产率OD260/280在1.8~2.0 视为抽提RNA纯度较好，浓度在4ug/ml以上的样品适于用分光光度计测定。

②进行甲醛变性琼脂糖电泳，确定RNA的完整性和污染情况。

③核酸分析仪测定RNA的质量和纯度。

1 、样品保存:加入Trizol混匀后，样品可在-70℃放置1~2 月;RNA 样品可以在70%酒精中-70℃保存 2~4 周:如果需要长期保存，应置于超低温冰箱中保存。使用冻存的细胞或组织抽提总 RNA 的效果通常比新鲜的细胞或组织差一些。因为在细胞或组织冻融过程中一些细胞或组织内的RNase会被释放出来并剪切样品。如果不能及时抽提RNA，推荐先加入适量Trizol，并裂解样品后冻存。

2 、Trizol 是强腐蚀性物质，为防止溅入眼睛，请戴防护眼镜或使用透明保护屏。若不慎污染皮肤或眼睛后，立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。

3 、所有离心管，枪头及相关溶液都必须无 RNA酶污染。耐高温器物可150℃烘烤4小时以去除 RNA 酶，其它器物去除RNA酶可考虑用0.01%的 DEPC 水浸泡过夜，然后灭菌，烘干。溶液需用 DEPC水配制。

4 、该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

5 、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作，且尽量不要对着 RNA 样品说话，以防 RNA 酶污染。