1. 自备试剂RNase 、无水乙醇、异丙醇、DEPC处理水等。
2. 细胞裂解或组织匀浆。
(1) 贴壁细胞：吸尽培养液，每10cm2细胞加入1ml Trizol。一般6 孔板每孔加1ml，12孔板每孔加 0.5ml，晃动 3-5下，再用枪吹打2-3下，确保全部裂解，然后吸至离心管中。
(2) 悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，每5x106~ 107动植物或酵母细胞或每107细菌细胞加入1ml Trizol。用枪吹打或适当涡旋振荡，确保全部裂解。某些酵母和细菌如裂解不充分，可用匀浆器匀浆，确保全部裂解。
(3) 植物组织：植物叶片直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨成粉末，每50-100mg植物叶片加入1ml Trizol。
注：经典模式植物如拟南芥、烟草、小麦、玉米等植物叶片能很好地提取RNA；但一些多糖多酚植物，如西红柿、棉花、毛白杨等，不能使用Trizol提取 RNA。
(4) 动物组织：按10-30mg组织加入1ml Trizol，用电动匀浆器或者一次性研磨杵充分匀浆。
2. 对于某些蛋白，多糖或脂含量很高的细胞或组织，Trizol裂解后可能会有不溶物或油脂状漂浮物。需12,000g，4℃离心10分钟，然后吸取澄清的裂解产物至一新的离心管中。
3. 室温放置 5 分钟，使样品充分裂解。
4. 每毫升Trizol加0.1ml氯仿替代物，涡旋震荡混匀或猛烈晃动15 秒，室温放置 2-3 分钟。
5. 12000g，4℃离心15分钟，吸取含总RNA的上层无色水相至一新的离心管中，每毫升Trizol约可吸取0.5-0.55ml。
6. 加入与上清等体积的预冷异丙醇，颠倒数次混匀，室温沉淀 10 分钟。如果希望提取microRNA等小 RNA，推荐-70℃沉淀过夜。
7. 12,000g，4℃离心10分钟，在管底可见RNA沉淀，弃上清。
8. 每毫升初的Trizol加入1ml 75%乙醇(DEPC水配制)，涡旋震荡或颠倒混匀。
9. 7,500g 4℃离心5分钟，弃上清。再用离心机甩一下(>5,000rpm, 离心1 秒)，小心吸尽液体。
10. 待RNA晾干后，加入20-50ul DEPC水溶解，-70℃冻存。注意：切勿让RNA过分干燥，否则将极难溶解，且测出的A260/280值会低于1.6。
11. 分析与定量(选做)
①测定样品在260nm和280nm的吸收值确定 RNA 的质量，按1OD=40pgRNA 计算RNA的产率OD260/280在1.8~2.0 视为抽提RNA纯度较好，浓度在4ug/ml以上的样品适于用分光光度计测定。
②进行甲醛变性琼脂糖电泳，确定RNA的完整性和污染情况。
③核酸分析仪测定RNA的质量和纯度。
