JC-10 是一种广泛用于检测线粒体膜电位△Ψm 的理想荧光探针。可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。在线粒体膜电位较高时,JC-10 聚集在线粒体的基质中,形成聚合物,可以产生红色荧光;在线粒体膜电位较低时,JC-10 不能聚集在线粒体的基质中,此时 JC-10 为单体,可以产生绿色荧光。这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。
线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。通过 JC-10 从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降,同时也可以用JC-10 从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。JC-10 单体的大激发波长为 515nm ,大发射波长为529nm ;JC-10 聚合物的大激发波长为585nm ,大发射波长为590nm 。实际观察时,使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的设置即可。
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答:可能的原因包括培养基质量、血清质量、温度、pH值、气体比例等。
解决方法有:
1. 使用高质量的培养基和血清,确保其无菌、无支原体污染,并保证在保质期内使用;
2. 培养箱温度和气体比例要保持稳定,定期校准;
3. 每天检查并记录细胞培养的环境参数,如温度、pH值、气体比例等,以便及时发现问题;
4. 定期更换培养基,保持细胞营养充足;
5. 对于生长缓慢的细胞株,可以尝试进行克隆筛选或更换培养基。
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