
2×HS Taq Master Mix(Dye Plus)包含热启动Fast Taq DNA Polymerase、dNTP、Mg2+及经过优化的缓冲体系,仅需加入引物和模板即可进行扩增,减少了繁琐的试验操作,提高了试验操作效率和结果的复现性,适用于常规PCR扩增。PCR产物 3’端带A,产物需纯化可直接用于TA载体克隆。组分中包含染料,可在PCR结束后直接电泳检测。

1. 配制检测试剂
试剂 | 体积(30ul) | 体积(50ul) |
2×HS Taq Master Mix (Dye Plus) | 15ul | 25ul |
正向引物(10μM) | 1ul | 2ul |
反向引物(10μM) | 1ul | 2ul |
模板 DNA | x ng* | x ng* |
DNase-free Water | up to 30ul | up to 50ul |
*针对不同来源或类型的模板,所需的反应浓度不同,下表为50µL反应体系推荐模板使用量。
模板类型 | 推荐模板用量 |
动植物基因组DNA | 0.1~1ug |
大肠杆菌基因组DNA | 10~100ng |
质粒DNA | 0.1~10ng |
λDNA | 0.5~10ng |
cDNA | 1~5ul(加入体积不宜超过反应总体积的1/10) |
2. 反应程序设置
95℃ | 3~5min | 预变性* |
95℃ | 15sec | 30~35cycles |
55℃** | 20sec | |
72℃ | 15sec/kb*** | |
72℃ | 5min | 终延伸 |
*该预变性条件适合绝大多数扩增反应,可根据模板结构复杂程度修改。如模板结构复杂,可将预变性时间延长至5~10min以提高预变性效果;
**退火温度需要根据引物的Tm值进行调整,一般设置为低于引物Tm值3~5°C即可;对于复杂模板,需要调节退火温度和延长延伸时间来实现高效扩增;
***对于产物序列在1.5kb以内的PCR反应(简单序列),延伸时间可设置为1sec;若需得到更高的PCR产量,序列长度在1~3kb的PCR反应,可延长延伸时间至15~30sec/kb ,3K以上的序列可调整延伸时间至30~60sec/kb。

1. 样品为革兰氏阳性菌、真菌等难裂解样品时,可通过震荡裂解等方法进行样品预处理,以促进DNA释放,提高扩增成功率。
2. 请于使用前确保产品完全解冻,彻底混匀后短暂离心,置于冰上备用。
3. 多次反复冻融可能会影响产品的性能。
4. 该试剂仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。
5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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答:可能的原因有:
1、IHC实验一抗和二抗不兼容;
2、没有足够的一抗与目的蛋白结合;
3、抗体可能不适用于IHC,因为其可能无法识别蛋白的天然(3D)形式;
4、一抗/二抗/信号放大试剂盒可能因储存不当、稀释不当或多次反复冻融而失去活性;
5、该蛋白不存在于目标组织中;
6、目的蛋白在组织中含量并不丰富;
7、二抗未避光保存(进行荧光检测时);
8、脱蜡可能不充分;
9、固定步骤可能会改变抗体识别的抗原表位;
10、抗体不能穿透蛋白所定位的细胞核(核蛋白);
11、PBS缓冲液被细菌污染,细菌会破坏目的蛋白上的磷酸基团(磷酸化蛋白);
12、抗原修复不全,对于甲醛固定的组织必须用充分抗原修复来打开抗原表位,以利于与抗体结合。
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