SNU-398 于 1990 年由 J.-G. Park 及其同事取自一名韩国患者的间变性肝细胞癌,该患者已通过脂质体加多柔比星和丝裂霉素-C 的组合进行了经导管动脉栓塞治疗。既可以附着细胞也可以悬浮细胞。悬浮的细胞是可行的,不应丢弃。通过温和离心 (125 xg) 回收悬浮细胞,以与贴壁细胞群一起进行继代培养。
1)来源: 人,肝组织
2)形态: 上皮样,多数贴壁少量悬浮
3)含量: >1x106 细胞数
4)规格: T25 瓶或者 1mL 冻存管包装
5)用途: 仅供科研使用
干冰运输及复苏好存活细胞:(1)1mL 冻存管包装干冰运输,收 到后-80 度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存 管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。(2)T25 瓶复苏的存活 细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作
1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)贴壁细胞:T25瓶置于37℃培养箱中约2-3h,显微镜下观察细胞的情况,若细胞密度在70%-80%左右,可进行传代,首次传代建议1:2(也可根据情况调整),若细胞生长不足70%,建议消化处理后,转移到新的T25培养瓶(1:1)继续培养。
4)半贴细胞或贴壁不牢(悬浮)细胞:T25瓶置于37℃培养箱中约2-3h,显微镜下观察细胞的情况,若细胞密度在60%以下,客户需收集T25瓶中的悬浮细胞离心后用完全培养基重悬后打回到原培养瓶中继续培养,若细胞生长70%-90%对细胞进行传代,传代时需要收集培养基中悬浮的细胞离心后回收。
5)备注:运输用的培养基(灌注培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议T25培养瓶1:2传代
1)准备培养基:1640培养基;优质胎牛血清,10%;p/s双抗,1%
注:上皮样细胞,多数贴壁,悬浮细胞和贴壁细胞同时存在。传代冻存时请收集悬浮细胞
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5% 。 温度:37 摄氏度,培养箱 湿度为 70%-80%。
3)冻存液:90%FBS,10%DMSO,现用现配
1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作, 并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意: 冻存管浸没在液氮中会泄漏,并会慢慢充满液氮。解冻时,液氮转化成气相可能 导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子,从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害
更新中
答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小;
2、样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作;
3、杂蛋白多,建议处理目的蛋白;
4、抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体;
5、抗体孵育时间过久,建议减少抗体孵育时间;
6、二抗与抗原有交叉反应,建议选择合适的封闭物;
7、二聚体或多聚体存在,建议增加蛋白质变性过程及强度;
8、底物显色与曝光时间过长,建议缩短显色及曝光的时间。
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