
牛血清是细胞培养中用量大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份,常用于动物细胞的体外培养,具有极为重要的功能:
(1)提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。
(2)提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调变它们所结合的物质活力。
(3)有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用。
(4)是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。
(5)起酸碱度缓冲液作用。
(6)提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。
(7)超级血清能兼容市面上基本上所有细胞,尤其是难养的干细胞;特级能兼容90%以上细胞;
根据牛出生时间和血清采制分离方法,血清一般分为胎牛血清、新生牛血清和小牛血清。胎牛血清为八月龄胎牛心脏穿刺取血再经热灭活、透析、过滤除菌后制成。本产品为特级胎牛血清,经过0.1 μm过滤除菌,低温缓慢解冻后即可使用。适用于干细胞、昆虫细胞、原代体细胞、传代体细胞、基因改造细胞、肿瘤细胞、异倍体细胞等细胞的培养与保存。

1. 解冻:温和的升温过程可有效减少沉淀的产生,不推荐直接高温解冻血清。
1)将冻存的血清移到2-8℃的冰箱中,过夜解冻;
2)或者将血清移至37℃水浴中,间歇性摇晃混匀底部的溶解物,直至全部溶解。
2. 基础培养基中胎牛血清的使用浓度一般为5-20%,根据细胞种类及实验需求按比例添加。

1. 避免反复冻融。血清解冻后,可在2-8℃条件下储存6周。如解冻后的血清储存时间需要大于6周,建议分装成合适的体积并重新冻存。
2. 如血清中含有大量的沉淀,不建议直接过滤血清。如有过滤需求,可将血清分装至无菌离心管中,稍微离心,取上清液直接加入培养基内混合后再过滤。
3. 若血清没有混匀且放置于高于40℃的水浴中,底部的蛋白会变性形成沉淀。
4. 使用时注意无菌操作,防止细菌污染。
5. 操作时请穿实验服,佩戴一次性手套。
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由于在37℃的温度下培养,会加剧纤维蛋白的析出和磷酸钙颗粒产生,可采用空培方式验证污染,血清按所需比例加入无菌培养基中(不加双抗),放培养箱中过夜,观察空培外观,若为澄清,则血清无污染。还可以通过将血清接种在细菌培养基上进行培养,观察是否存在细菌增殖,并且进行革兰氏染色,用油镜观察直接判断是否为微生物污染。
血清中产生沉淀原因可能是:
① 血清热灭活;② 37℃ 孵育;③ 频繁的解冻与冻存操作;④ 解冻过程中未混合;⑤ 经γ-辐照;⑥ 2-8℃ 长时间储存;如果血清中含有沉淀,
若去除这些絮状沉淀物,可将血清分装至无菌离心管中,以3000rpm离心5-15min,去除大颗粒沉淀,收集上清液加入培养基内一起过滤。
当细胞培养实验需更换血清品牌时,做程序性梯度替换方案尤为重要,因为不同品牌的血清所含成分有所差异,血清更换会使细胞发生不适,从而出现细胞增殖缓慢或细胞状态不佳等情况。
血清梯度替换过程如下:
(1)用20%新血清与80%原血清进行混合,培养传代1-2次;
(2)用50%新血清与50%原血清混合培养传代;
(3)再用80%新血清与20%原血清混合培养传代;
(4)完全使用新血清培养传代。
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