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血清沉淀增多的原因及解决方法
由于在37℃的温度下培养,会加剧纤维蛋白的析出和磷酸钙颗粒产生,可采用空培方式验证污染,血清按所需比例加入无菌培养基中(不加双抗),放培养箱中过夜,观察空培外观,若为澄清,则血清无污染。还可以通过将血清接种在细菌培养基上进行培养,观察是否存在细菌增殖,并且进行革兰氏染色,用油镜观察直接判断是否为微生物污染。
血清中产生沉淀原因可能是:
① 血清热灭活;② 37℃ 孵育;③ 频繁的解冻与冻存操作;④ 解冻过程中未混合;⑤ 经γ-辐照;⑥ 2-8℃ 长时间储存;如果血清中含有沉淀,
若去除这些絮状沉淀物,可将血清分装至无菌离心管中,以3000rpm离心5-15min,去除大颗粒沉淀,收集上清液加入培养基内一起过滤。
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如何做血清的梯度替换?
当细胞培养实验需更换血清品牌时,做程序性梯度替换方案尤为重要,因为不同品牌的血清所含成分有所差异,血清更换会使细胞发生不适,从而出现细胞增殖缓慢或细胞状态不佳等情况。
血清梯度替换过程如下:
(1)用20%新血清与80%原血清进行混合,培养传代1-2次;
(2)用50%新血清与50%原血清混合培养传代;
(3)再用80%新血清与20%原血清混合培养传代;
(4)完全使用新血清培养传代。