Dulbecco's 改良培养基--DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium)是在MEM培养基的基础上研制的,与MEM培养基相比,氨基酸的含量增加了2倍,维生素的含量增加了4倍,同时还增加了非必须氨基酸、微量铁离子以及丙酮酸钠。DMEM培养基初设计葡萄糖含量为1000 mg/L(低糖型),后来又发展出葡萄糖含量为4500 mg/L(高糖型),现已广泛应用于各种细胞的培养。
DMEM高糖型培养基普遍应用于生长快、粘附性低的细胞、杂交瘤的骨髓瘤细胞、克隆细胞、DNA转染的转化细胞、各种原代病毒宿主细胞、单一细胞的培养以及疫苗的生产,例如利用CHO细胞表达EPO和生产乙肝疫苗。
本产品含有多类细胞培养所需的氨基酸、维生素、无机盐等多种成分,但不含蛋白质、脂类或任何生长因子,故此产品需搭配血清或无血清添加物使用。
1、本产品经0.1 μm过滤除菌,使用时应注意无菌操作,避免污染;
2、为保持本产品的佳使用效果,请勿进行冻融处理;
3、本产品仅用于科研或进一步研究使用,不用于诊断和治疗。
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一旦在细胞培养的过程中发现有黑点生成,首先,要肉眼观察培养基是否混浊,然后,在镜下观察培养细胞生长的状态,黑点是否游动。如果细胞被污染,微生物则会大量繁殖,培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。如果在镜下观察细胞,生长状态良好,与黑点出现前相比,没有任何变化,那么,黑点的出现可能与以下几种情况有关:
(1)细胞生长过老,破碎的细胞残骸;
(2)配制培养基的pH值偏高,不宜细胞生长;
(3)培养原代细胞中出现小黑点,可能是原代组织中的杂质,多次传代可以消除;
(4)血清等级不足以维持细胞良好的生长,更换高等级的胎牛血清。
答:可能的原因包括培养基质量、血清质量、温度、pH值、气体比例等。
解决方法有:
1. 使用高质量的培养基和血清,确保其无菌、无支原体污染,并保证在保质期内使用;
2. 培养箱温度和气体比例要保持稳定,定期校准;
3. 每天检查并记录细胞培养的环境参数,如温度、pH值、气体比例等,以便及时发现问题;
4. 定期更换培养基,保持细胞营养充足;
5. 对于生长缓慢的细胞株,可以尝试进行克隆筛选或更换培养基。
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