亲脂性荧光染料PKH67(Green)和PKH26(Red) 适用于常规细胞膜标记。荧光染料PKH67 是一种可对体外和体内细胞示踪的绿色荧光染料，通过与膜结构的脂质分子结合而标记细胞。PKH67对细胞毒性较小，荧光背景低，脂溶性高，能够轻易穿透细胞膜，有着强而稳定的绿色荧光。经PKH67标记的细胞可用于体外和体内增殖研究，且具有不会使邻近细胞染色的功能。在细胞分裂增殖过程中，PKH67 的荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减，标记荧光可平均分配于两个子代细胞中，因此其荧光强度是亲代细胞的一半，根据这一特性，它可被用于检测细胞增殖，细胞周期的估算及细胞分裂等方面。PKH67标记细胞的荧光非常均一，并且分裂后的子代细胞的荧光分配也更均一。在细胞分裂增殖过程中，PKH67标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，荧光强度变为亲代细胞的一半，通过流式细胞仪根据荧光强度的不同，可检测出未分裂细胞，分裂一次(1/2 的荧光强度)，二次(1/4 的荧光强度)，三次(1/8的荧光强度)，以及更多分裂次数的细胞。PKH67 可检测分裂次数多达六次甚至更多。除了用于细胞增殖检测，PKH67 还可以用于细胞的体外盒体内示踪，标记后荧光在胞内表达稳定，阳性标记率达98%以上，标记细胞形态良好，能有效地观察细胞在体外的诱导分化情况；或将标记的细胞注于体内，可以有效的显示移植细胞在活体组织中的迁移及分化。PKH67标记的细胞用于体内观察可以长达数周之久，它常被用来做活体细胞检测实验和用荧光电镜观察细胞长期活动的实验。PKH67 毒性较小，不影响细胞的增殖能力。此方法操作简单，且不用放射性同位素，不存在安全隐患。可以更快速，更准确和更安全地得到想要的实验数据。

由于炭尾长度更长，内部研究已经证明PKH67比PKH2由更少的细胞间转移。在采用PKH1和PKH2进行的体内研究中，荧光强度都会缓慢损失。由于这是绿色细胞linker染料而非红色细胞linker染料出现的行为特征，因而PKH67会出现类似的性质。不分裂细胞的体外细胞膜留存和体内荧光半衰期的关联性揭示，PKH67的体内荧光半衰期为10-12天。其他具有类似半衰期的绿色细胞linker染料已经被用于监测1-2月内的体内 淋巴细胞和巨噬细胞运输，结果表明PKH67还可用于中等时长的体内跟踪研究。

染料可以稳定的与细胞膜脂质区结合并发出荧光，主要用于细胞体外标记、体外细胞增殖研究以及体内外的细胞示踪研究。PKH67的体内荧光半衰期为10-12天。相比于PKH-67，PKH-26具有更长的半衰期，标记在兔红细胞上的PKH26半衰期长达100天以上。特别适用于体外增殖研究以及长期的体内细胞跟踪研究。PKH67标记细胞后通常用流式细胞仪进行细胞增殖检测。

（1）从冰箱中取出PKH67试剂，静置几分钟至室温，或者37℃水浴片刻后，离心盛放PKH67 的管子，开盖前请务必离心几分钟让试剂充分落入管底后才能开盖。

（2）根据需要检测的细胞样品数，用稀释液将探针10倍稀释，再用合适的溶液(如：无血清培养基，HBSS或PBS)将PKH67母液25倍稀释，配制成染色工作液。佳工作液浓度请根据不同细胞和自身的实验体系来调整。一般细胞使用按试剂盒中的母液的终浓度250倍稀释即可，有些细胞可能需要适当增加浓度。

2. 细胞染色

（1）将制备好的待测细胞用100μl染色工作液重悬，至细胞浓度大约10⁷/ml。也可以进行原位染色，染色液足够覆盖细胞即可。

（2）在2～8 ℃培养细胞 15～30分钟，不同的细胞佳培养时间不同。

建议待标记细胞在染色工作液中于37℃孵育5min，再于4℃孵育15min。

低温孵育可降低细胞对染料的内吞作用用，有助于染料对质膜的标记，并且降低染料定位细胞质囊泡的可能性。

（3）离心后去上清，收集细胞，用PBS或无血清培养基洗涤细胞1-2次，后加入PBS或无血清培养基重悬细胞。

（4）取500μl 细胞悬液，用流式细胞仪检测。Ex/Em=490/502nm。

（5）随后还可按照细胞的正常培养方法进行培养。

可以在荧光显微镜下直接观察标记效果，也可以在培养适当时间后再用流式细胞仪检测细胞增殖，或用于其他特定实验目的的细胞荧光示踪。