活细菌/死细菌双染试剂盒也称细菌活力检测试剂盒(Bacterial Viability Assay Kit)或细菌毒性检测试剂盒(Bacterial Cytotoxicity Assay Kit)，是一种高效、便捷、灵敏的基于DNA绿色荧光染料DMAO和红色荧光染料碘化丙啶(Propidium iodide, PI)的双荧光染色法检测细菌死活的试剂盒。本试剂盒检测时，活细菌呈现绿色荧光，死细菌呈现绿色和红色两种荧光。本试剂盒可使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光酶标仪、流式细胞仪等荧光检测系统进行检测。

DMAO，即N, N-dimethylaniline N-oxide，是一种核酸绿色荧光染料，对于革兰氏阳性和阴性细菌均适用，且既能染色活细菌，也能染色死细菌。该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，优先结合双链DNA。DMAO非常稳定，在室温下进行常规操作和保存不易降解。PI是一种非渗透性荧光染料，不能穿过具有生物活性的细胞质膜，因此对于具有完整细胞膜的细菌不能染色。而对于坏死细菌，其细胞膜的完整性丧失，PI可进入细胞核并与双链DNA结合，并嵌入细菌的DNA双螺旋形成PI-DNA复合物从而产生红色荧光，这种结合很少或几乎没有序列偏好，每4-5个碱基对插入一分子PI染料[1,2]。将DMAO与PI联合使用检测细菌的死活，具有完整细胞膜的活细菌呈现绿色荧光，细胞膜受损的死细菌同时呈现绿色与红色荧光[3-6]。

 DMAO-DNA复合物的大激发光波长为503nm，大发射光波长为530nm；PI-DNA复合物的大激发光波长为535nm，大发射光波长为617nm。DMAO-DNA和PI-DNA的激发光谱和发射光谱参考图1，可分别使用FITC和Cy3通道观察。本试剂盒提供的DMAO与PI均为1000X的储存液，溶液经过优化，对大多数细菌都适用，但为了获得更满意的结果，对于不同类型的细菌请自行进行一定的浓度摸索，DMAO和PI的使用终浓度一般为0.5-2X，优先的推荐终浓度为1X。同时，本试剂盒提供检测缓冲液，该缓冲液可用于细菌死活染色工作液的配制。

1.细菌染色前应去除培养基，培养基内的组分会结合DMAO与PI染料，使染色效率降低。

2.荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

3.初次使用时DMAO (1000X)和PI (1000X)可适当分装后-20ºC保存，以避免反复冻融。

4.检测缓冲液经过过滤除菌处理，在使用时须注意避免微生物污染，否则很可能严重影响染色效果。如果检测缓冲液发生浑浊等明显的微生物污染，就不能继续使用。

5.荧光酶标仪检测时须使用适合荧光检测的黑板或白板

6.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

7.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。