

辛苦做了半年ELISA实验,数据美如画,开开心心打开Origin软件准备分析结果的时候,却冒出来一堆问题:
如何正确导入标准曲线数据?
制作正常的标准曲线和分析拟合度的正确教程是怎样的?
样本数据是怎么准确计算的?
ELISA的样本通常要设置1~2个复孔进行检测,分别求出标准品、实验组样本的吸光度的平均值。单个样本的检测值不应超出平均值的20%。
样本的OD(吸光度)平均值要减去标准品浓度为0时的OD平均值(调零)。
开始制作标准曲线
在对数坐标图上拟合四参数的逻辑函数曲线(X轴上为标准品浓度,Y轴为对应的OD值)。这里以origin软件为例。
详细操作步骤如下:
步

第二步

选中输入的数值框,按如下操作依次点击选项。

第三步

完成上述操作,后点击Fit按键,拟合标准曲线和相关信息将自动生成。
第四步

第五步
在下方选择第四个工作表(Fit NLF Find X from Y1),在左列输入样本的OD值,对应的浓度将在右列自动生成。

如果样本的OD值超出标准曲线的上限,计算结果可能不准确,请在实验前适当稀释样本以获得精确结果。在分析数据时,样本实际浓度应为标准曲线上获得的浓度乘以稀释倍数n。

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