一、产品亮点
普美生物全新推出的超敏ECL Plus发光底物检测试剂盒(PMK0666)，专为Western Blot实验设计，可检测直接或间接标记辣根过氧化物酶(HRP)的抗体及其关联的抗原。采用独特的发光底物系统，在降低曝光背景的同时引入新型氧化剂，大幅提高试剂盒稳定性，可在4℃避光保存一年以上！
本产品配制的ECL工作液衰减缓慢，15分钟内荧光几乎无减弱，检测时产生的非特异背景极低，节省抗体和样品用量，适用于PVDF膜和NC膜的Western blot免疫印迹等印迹发光显色，不仅可用于X光胶片曝光，还可直接使用荧光CCD扫描，为您的实验提供更多选择！
二、产品原理
蛋白质或核酸在电泳后转移到印迹膜上，以一抗及HRP标记的二抗结合膜上的目的蛋白，或以HRP标记的探针直接或间接结合膜上的核酸。洗膜后用本产品配制的ECL工作液，室温孵育膜数分钟，将印迹膜用封口膜包被粘贴固定于X光片曝光暗盒。然后转入暗室将X光胶片压在膜上曝光数秒到数小时，显影定影后蛋白质或核酸条带可清晰显示在X光胶片上。
三、产品优势
1
超高灵敏度
可检测低丰度蛋白，让您的目标条带清晰可见
2
超低背景
非特异性背景极低，让您的结果更加干净清晰
3
超长稳定性
4℃密封避光保存一年以上，实验无忧
4
快速反应
ECL工作液15分钟内荧光几乎无减弱，实验效率高
5
双重兼容
既适用于传统X光胶片曝光，也支持荧光CCD扫描
6
节省试剂
减少抗体和样品用量，降低实验成本
7
膜兼容性广
完美适配PVDF膜和NC膜(硝酸纤维素膜)
四、使用步骤
执行常规电泳、转膜、HRP标记抗体或者HRP标记核酸探针孵育、洗膜。ECL发光底物是HRP的显色底物，因此检测系统终必须基于HRP酶标记抗体或者核酸探针。
1.新鲜配制发光工作液
后一次洗膜的同时，分别取等体积的A液和B液1:1混合，混匀后室温放置备用。取A液和B液一定要用不同的枪头，建议工作液现配现用(100~200μl发光工作液/cm²膜)。
2.膜与发光工作液孵育
用平头镊取出膜，轻触滤纸除去多余洗液(勿使膜完全干燥)。将膜完全浸入发光工作液中，室温孵育1-3分钟，准备立即压片曝光。孵育时间过长不会增加灵敏度，有时还会导致曝光条带异常。
3.去除多余液体
用平头镊子夹起膜，轻触吸水纸去除多余液体，留少量工作液，不可让膜完全干燥。
4.固定膜并准备曝光
将膜迅速放在两片洁净的封口膜中间，去除气泡和皱褶，用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖印迹膜的封口膜固定在暗盒内，蛋白带面向上。
5.曝光检测
暗房内取一张X光胶片至于包裹的膜上压片，分别曝光不同的时间(如数秒到数分钟)，显影定影冲洗。曝光时间需根据曝光强度做相应调整。若是背景过高，可使用两张X光胶片同时压片。亦可采用荧光成像仪检测，将膜放置到荧光成像仪内，按仪器说明书进行检测。
五、常见问题解答
Western Blot(WB)实验中胶片是一片空白，是怎么回事？
答：如果能够排除下面的几个问题，那么问题多半出现在一抗和抗原制备上：
二抗的HRP活性太强，将底物消耗光；
ECL底物中H₂O₂不稳定，失活；
ECL底物没覆盖到相应位置；
一抗选择不当；
二抗失活。
六、引用文献
1.AB1-42 promotes microglial activation and apoptosis in the progression of AD bybinding to TLR4.
2.A Dihydroartemisinin -Loaded Nanoreactor Motivates AntiCancer Immunotherapyby Synergy Induced Ferroptosis to Activate Cgas/STING for Reprogramming of Macr-ophage.
3.Protein lysine acetylation played an important role in NH3induced AEC2 damageand pulmonary fibrosis in piglets.
4.Tea leaf-derived nanovesicles for ferric-supply amplified ICD and macrophage reprogramming to boost immunotherapy against head and neck squamous carcinoma.
5.Blockade of Kv1.3 Potassium Channel Inhibits Microglia-Mediated Neuroinfla-mmation in Epilepsy.
七、一站式ECL发光底物检测试剂盒
除了PMK0666超敏ECL Plus发光底物检测试剂盒（高飞克级），普美生物还推出多款ECL发光底物检测试剂盒，满足发光底物检测的一站式需求：
