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Q-PCR实验中熔解曲线异常
解决方案:
1.优化引物设计,提高退火温度。
2.使用探针法减少非特异性扩增。
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Q-PCR实验中Ct值过高
解决方案:
1.增加模板量或优化反应条件。
2.检查引物效率和特异性
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Q-PCR实验中污染问题
解决方案:严格分区操作(样品准备区、反应配制区、扩增区),避免使用污染的移液枪和试剂。
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Q-PCR实验中RNA反转录问题
解决方案:
1.使用无RNase的试剂和耗材。
2.优化反转录反应条件。
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Q-PCR实验中标准曲线线性差
解决方案:
1.重新稀释模板,确保梯度准确。
2.检查引物效率和反应条件。
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Q-PCR实验中荧光信号弱
解决方案:检查荧光染料和探针质量。或增加探针\染料浓度。
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Q-PCR实验中重复性差
解决方案:确保加样准确,混匀反应体系。
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Q-PCR实验中扩增效率低
解决方案:重新设计引物或优化反应体系(如Mg²⁺浓度)。
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Q-PCR实验中非特异性扩增
解决方案:优化引物设计,提高退火温度。或使用探针法(如TaqMan)提高特异性。
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Q-PCR实验中无扩增信号
可能原因:
1.模板浓度过低或降解。
2.引物设计不佳或反应条件不适。