考马斯亮蓝G250能与蛋白质快速结合。考马斯亮蓝G250在游离状态下大光吸收在488nm，其与蛋白质结合后呈蓝色，在595nm处有大吸收值，并且光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量检测。本产品也可以作为Bradford法蛋白定量检测试剂盒的补充试剂。

1. (可选)绘制标准曲线(酶标仪法)：将BSA用水溶解配制0.5 mg/mL的蛋白标准工作液。将蛋白标准工作液分别按0，1，2，4，8，12，16，20μL加到96孔板中，然后用PBS或生理盐水依次加20，19，18，16，12，8，4，0μL将上述梯度工作液补足到20μL。得到蛋白浓度依次为0，25，50，100，200，300，400，500μg/mL的梯度曲线。如只是做相对定量比较，则无需绘制标准曲线。

2. 准备待测样品：将待测的蛋白样品进行适当稀释(可通过预实验检测，使样品蛋白浓度在标准曲线范围内，确保检测结果可信)，按照每个样品20μL的量加到96孔板中。待测样品稀释需与蛋白标准品用相同溶液。

3. 检测：向以上每孔加入200μL考马斯亮蓝G250溶液充分混匀(可将96孔板放在振荡器上振荡30s)，室温放置3-5 min后，以标准曲线0号做参比，在595nm波长下比色测定，记录各孔吸光度值。

4. 计算：以标准曲线中梯度蛋白含量(μg/mL)为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应孔中待测样品的蛋白浓度(μg/mL)，再乘以样品稀释倍数即为待测样品实际蛋白浓度。

另：如用分光光度计测定，则用玻璃试管或玻璃比色管为反应容器制作标准曲线。待测蛋白样品做适当稀释后，加入到新的玻璃试管或比色管中，样品量为1mL。向标准曲线梯度管及样品管中各加入考马斯亮蓝G250溶液3mL，充分混匀，室温静置3-5min后用分光光度计进行比色检测。

检测时分光光度计波长设置595nm，以标准曲线0号管为参比调零，检测标准曲线及待测样品。按照步骤4的方法绘制标准曲线及计算待测样品中的蛋白浓度。

1. 本产品使用前需恢复至室温，并颠倒混匀，以免影响检测的灵敏度。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3. 该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。