Super Fluor 系列（可替代Alexa Fluor 系列）荧光探针，具有更强的荧光强度，更广的pH应用范围（pH 4～10）, 更好的抗淬灭性。在生物荧光领域已逐渐替代FITC,Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7等荧光染料。

1) 用0.1 M NaHCO₃溶解至终浓度为2mg/mL

将1ml去离子水加入84mgNaHCO₃瓶中，配成1M 的碳酸氢钠溶液。振荡或吹打至完全溶解。该溶液pH 约8.3，2～6℃保存可用2星期；若抗体是溶液，将抗体稀释至2mg/mL，再加入1/10体积的上述碳酸氢钠溶液；若抗体是冻干粉，将1M 碳酸氢钠溶液用10倍去离子水稀释成0.1M 后，用其将抗体溶成2mg/mL的溶液；

2）染料溶解：活化Super Flour SE染料固体粉末从冰箱放入干燥器中慢慢升至常温后，用无水DMSO将染料配置浓度为1 mg/mL。

3）标记：在1mL蛋白溶液中缓慢加入适量染料溶液，（蛋白:染料摩尔比=1:20～50；质量比可在以下范围内优化10～200ug Super Flour SE 每毫克IgG抗体）。同时在暗处常温缓慢搅拌1小时。也可以直接将蛋白溶液直接加入染料的固体粉末的试剂瓶中，同时在暗处常温缓慢搅拌1小时。

4）纯化：用透析法或者葡聚糖Sephadex纯化产品后，产品冷冻干燥成粉末或在0.01 M PBS/2mM叠氮化钠溶液中，-20℃避光储存。

5）贮存：标记好的蛋白贮存于2～6℃，避光。若纯化的蛋白偶联物浓度小于1mg/mL，加入BSA 或其他稳定蛋白1～10mg/ml。在2mM 叠氮钠存在的情况下，2～6度可保存几个月。保存更长时间，则需分装后-20℃保存。避免反复冻融，避光保存。

对于IgG 等大多数抗体来说，摩尔吸光系数为203000，F/P值在4～9之间是合适。

Super Flour 647标记蛋白F/P值计算：

1）用PBS 精确倍数稀释定量的少许纯化过的偶联蛋白，在1cm比色皿中测定280nm和650nm的光吸收；

2）计算样品中的蛋白浓度：蛋白摩尔浓度=(A280-(A650×0.03))×稀释倍数/203000

3）计算标记比例：每摩尔蛋白结合的染料摩尔数=A650×稀释倍数/(239000×蛋白摩尔浓度)。

1. 其水溶液现配现用，不能储存；

2. 任何溶解后的染料好立即使用；

3. 无水的DMSO溶液-20°C保存多2个星期。