20-320ng/mL

10ng/mL

板内变异系数<15%，板间变异系数<15%

范围从 90%到 110%，平均回收率 96% 

检测具有高灵敏度和优良的特异性。与三碘甲状腺原氨酸（T3）、反三碘甲状腺原氨酸（rT3）没有显著交叉反应。

血清、血浆

本试剂盒采用竞争抑制酶联免疫吸附法原理。酶标板预包被纯化的抗T4抗体。将待测抗原（标准品或样本）和生物素标记的抗原加入到酶标板中，它们对固相抗体进行竞争结合。接着洗涤去除未结合的物质，加入酶标记的亲和素，形成固相抗体-生物素化T₄-酶标亲合素复合物。然后，加底物显色，酶促反应产生蓝色物质，加入终止液后，变成黄色。颜色深浅与样本中待测抗原的含量呈现负相关。在450nm 波长下测定吸光值。后通过建立标准曲线，根据 OD 值来计算样品中 T4的浓度。

酶标仪（能测 450nm 处的吸光度）

多通道移液器或自动洗板机

恒温箱、低温离心机

可调节式移液枪及枪头

去离子水

注意：各组分（小管试剂）开盖前，请先低速离心。

1.使用前将所有试剂平衡至室温(18-25℃)。按照酶标仪说明书进行设置检测波长为450nm，并在读板前预热 15 分钟。

2.洗涤液:取浓缩洗涤液，根据检测数量，用去离子水或蒸馏水1：20稀释，混匀后备用。

血清：让血样在室温下凝结 2 小时或在 2-8℃下过夜，然后在 2-8℃下 2000×g 离心 15 分钟。随后立即取上清液进行检测，或存储在-20℃或-80℃备用。

血浆：使用 EDTA 或肝素作为抗凝剂收集血浆。采集后 30 分钟内，在 2-8℃,2000×g 条件下离心样品 15 分钟，随后立即取上清液进行检测，或存储在-20℃或-80℃下备用。

注意：不要使用严重溶血或脂血的标本。如果样品要在2天内使用，则可以将其储存在2-8℃，长期保存需分装存储在-20℃或-80℃，避免反复冻融。测定前，应将冷冻样品缓慢升至室温并轻轻混合。

1. 从板框上取下多余的板条，将它们放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封。

2. 每孔加入50μL标准品或样品，建议所有标准品和样品做复孔。然后每孔加入50μL生物素化抗原，充分混匀，给酶标板覆膜，37℃孵育1h。

3. 手工洗板：弃去每孔中的液体，每孔加入350μL洗涤液。浸泡30秒再倒出每孔中液体并在干净的吸水纸上拍干。重复这个洗涤步骤，共3遍。洗板机洗板：选择洗涤3次程序洗板后拍干。

4. 每孔加入50μL 的酶标亲合素，混匀，盖上封板膜。37℃孵育30分钟。

5. 手工洗板：弃去每孔中的液体，每孔加入350μL洗涤液。浸泡30秒再倒出每孔中液体并在干净的吸水纸上拍干。重复这个洗涤步骤，共5遍。洗板机洗板：选择洗涤5次程序洗板后拍干。

6. 每孔加入50μL显色物A 和 50μL显色物B，振荡混匀后，置37℃避光显色15分钟，远离气流和其他温度波动。

7. 每孔加入50μL终止液，终止液应按照与显色物相同的顺序加到板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。 如果孔中的颜色为绿色或颜色变化不均匀，请轻轻敲击板以确保彻底混合。

8. 30min 内测定每孔450nm 处的吸光值。

以x 轴为OD值，y轴为标准品浓度拟合一条标准曲线，通过回归分析确定回归方程。将样本OD值作为x带入方程计算y值（浓度）。

典型标准曲线（R²≥0.99）

人甲状腺素(T4)标准曲线。数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验建立标准曲线

1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验，尤其是在检测血样或其他体液时。终止液有一定的腐蚀性，操作时请做好防护措施。

2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究，如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途，我们将不对任何后果负责。

3. 本试剂盒应在有效期内使用，并请严格按照说明书进行存储。

4. 新打开的ELISA酶标板可能含有水雾样物质，此为正常现象，不会对实验结果产生任何影响。未用完的板条应立即放回装有干燥剂的铝箔袋中，重新密封并在-20℃下存储。

5. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。

6. 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。

7. 为了得到准确的实验结果，在孵育过程中，必须确保封板膜将酶标板密封。

8. 在使用自动洗板机时，添加清洗缓冲液后，在清洗步骤之间添加30秒的浸泡时间可提高分析精度。

9. 显色物溶液保存过程中应为无色，加入到酶标板中之后应从无色变为渐变蓝色。