本试剂盒采用双抗体夹心 ELISA 法。用抗大鼠ET-1抗体包被于酶标板上,实验时样品(或标准品)中的大鼠ET-1 会与包被抗体结合。后依次加入生物素化的抗大鼠 ET-1 抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素,抗大鼠 ET-1 抗体与结合在包被抗体上的大鼠ET-1结合,生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB 在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD 值,ET-1浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中ET-1的浓度。
酶标仪(能测 450nm 处的吸光度)
多通道移液器或自动洗板机
恒温箱、低温离心机
可调节式移液枪及枪头
去离子水
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可能原因 解决措施是
1,标准品稀释不正确。 确保标准品按照推荐方法溶解和稀释。
2,移液不准确。 定期校准移液器并检查枪头密封性。
3,反应液蒸发。 用封板膜密封酶标板。
4,洗板不彻底。 足够的洗涤次数和加入足量洗涤液。
5,孔底有异物。 读数前清洁板底。
可能原因 解决措施是
1,试剂反应不充分 确保孵育时间并按推荐温度孵育
2,试剂体积添加不足 检查移液器并严格按照操作步骤操作
3,稀释不正确 检查试剂稀释步骤
4,酶结合物失活 混合酶结合物和底物,通过显色反应检查
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