该试剂盒采用竞争ELISA法。酶标板预包被去甲肾上腺素(NE)抗原。将待测抗原(标准品或样本)和生物素标记的抗去甲肾上腺素(NE)抗体加入到酶标板中,样品或标准品中的去甲肾上腺素(NE)与包被的去甲肾上腺素(NE)竞争生物素标记的抗去甲肾上腺素(NE)抗体上的结合位点。接着洗涤去除未结合的物质,加入链酶亲和素-辣根过氧化物酶(SA-HRP)以形成固相抗原-生物素标记抗体-SA-HRP的复合物。然后,将TMB 溶液加入孔中并进行孵育,酶促反应产生蓝色物质,加入终止液后,变成黄色。颜色深浅与样本中待测抗原的含量呈现负相关。在450nm 波长下测定吸光值。后通过建立标准曲线,根据OD值来计算样品中去甲肾上腺素(NE)的浓度。
酶标仪(能测 450nm 处的吸光度)
多通道移液器或自动洗板机
恒温箱、低温离心机
可调节式移液枪及枪头
去离子水
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可能原因 解决措施是
1,试剂反应不充分 确保孵育时间并按推荐温度孵育
2,试剂体积添加不足 检查移液器并严格按照操作步骤操作
3,稀释不正确 检查试剂稀释步骤
4,酶结合物失活 混合酶结合物和底物,通过显色反应检查
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