α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(α-L-Arabinofuranosidase,α-L-Af)属于糖基水解酶家族,是一种能够水解非还原呋喃阿拉伯糖残基的糖苷酶类。α-L-Af可以从含有阿拉伯糖残基的多聚物如细胞壁阿拉伯木聚糖、阿拉伯聚糖和阿拉伯半乳聚糖等中性糖的非还原末端水解生成一个 L-阿拉伯糖分子,促使这些中性糖不断解离,促进果胶的增溶和降解。由于果实成熟过程中常常伴随着阿拉伯糖的丧失,该酶活性在果实成熟软化中具有重大意义。本试剂盒提供了一种简单易用的比色法,用于分析各种生物样品中α-L-Af的活性。其原理是α-L-Af 分解对硝基苯基-α-L-阿拉伯呋喃糖苷生成对-硝基苯酚,对-硝基苯酚在 400 nm 处有大吸收峰,通过测定 400 nm 处吸光值变化可计算得α-L-Af 活性。
酶标仪或可见光分光光度计(能测400nm处的吸光度)及恒温箱
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
离心机、制冰机
去离子水
匀浆器(如果是组织样本)
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小;
2、样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作;
3、杂蛋白多,建议处理目的蛋白;
4、抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体;
5、抗体孵育时间过久,建议减少抗体孵育时间;
6、二抗与抗原有交叉反应,建议选择合适的封闭物;
7、二聚体或多聚体存在,建议增加蛋白质变性过程及强度;
8、底物显色与曝光时间过长,建议缩短显色及曝光的时间。
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