超氧化物歧化酶(SOD,EC1.15.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是催化超氧阴离子歧化成 O2和 H2O2的酶。SOD 不仅是超氧化物阴离子清除酶,也是 H2O2主要生成酶,它们是抗暴露于O2的所有细胞中超氧化物自由基毒性的重要抗氧化剂。异常的 SOD 活动与肌萎缩侧索硬化,围产期致死,神经紊乱和癌症等疾病有关。超氧化物歧化酶有三大类:Cu/Zn,Fe/Mn 和 Ni 型。人体中存在三种形式的超氧化物歧化酶。SOD1 位于细胞质中,SOD2 位于线粒体中,SOD3位于细胞外。本试剂盒提供一种简单易用的测定法,用于定量测定血清,血浆,组织/细胞和其它生物体液中的 SOD 酶活性。通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-),O2-与四唑盐WST-8反应生成水溶性甲瓒,后者在450nm 处有吸收;SOD 可清除O2-,从而抑制了甲臜的形成,因此产生更少的显色反应。用比色法测定了SOD在450nm处的抑制活性。SOD的活性与甲臜的生成量成负相关。
酶标仪或可见光分光光度计(能测450nm处的吸光度)
恒温箱、制冰机、低温离心机
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
去离子水
匀浆器(如果是组织样本)
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验,尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究,如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途,我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用,并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用;否则,可能导致结果异常。
5. 勤换吸头,避免各组分之间的交叉污染。
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通常可以按比例缩小,如说明书中是约0.1g组织加1ml提取液,可以等比例缩小,如0.05g组织加0.5ml提取液提取。后续操作不变。此外,对于数量少、酶活性低的样品,一方面可以减少提取液体积,另一方面还可以延长反应时间。
生化试剂盒初一般是采用分光光度法,用分光光度计测量吸光度。微量法是随着酶标仪和微孔板的普及,改用酶标仪和酶标板测量吸光度。除了仪器不同以外,主要差别是反应体系更小,一般不超过250ul,计算公式的系数会有一定变化。
d:由比色皿光径,1cm改为96孔板直径,0.5 cm(也有0.6cm的)
但对于标明只用分光光度法的试剂盒,不建议使用酶标仪进行酶活性测定。非要用酶标仪进行检测,一定要按照说明书将反应体系缩小至250微升左右,加样表中各试剂体积一定要按照比例缩小。不过,因为初研发时是按照分光光度法进行设计和调整的,用户改变测定仪器后,我们不保证能够取得好的结果。
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