超氧化物歧化酶(SOD,EC1.15.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是催化超氧阴离子歧化成 O2和 H2O2的酶。SOD 不仅是超氧化物阴离子清除酶,也是 H2O2主要生成酶,它们是抗暴露于O2的所有细胞中超氧化物自由基毒性的重要抗氧化剂。异常的 SOD 活动与肌萎缩侧索硬化,围产期致死,神经紊乱和癌症等疾病有关。超氧化物歧化酶有三大类:Cu/Zn,Fe/Mn 和 Ni 型。人体中存在三种形式的超氧化物歧化酶。SOD1 位于细胞质中,SOD2 位于线粒体中,SOD3位于细胞外。本试剂盒提供一种简单易用的测定法,用于定量测定血清,血浆,组织/细胞和其它生物体液中的 SOD 酶活性。通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-),O2-与四唑盐WST-8反应生成水溶性甲瓒,后者在450nm 处有吸收;SOD 可清除O2-,从而抑制了甲臜的形成,因此产生更少的显色反应。用比色法测定了SOD在450nm处的抑制活性。SOD的活性与甲臜的生成量成负相关。
酶标仪或可见光分光光度计(能测450nm处的吸光度)
恒温箱、制冰机、低温离心机
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
去离子水
匀浆器(如果是组织样本)
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验,尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究,如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途,我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用,并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用;否则,可能导致结果异常。
5. 勤换吸头,避免各组分之间的交叉污染。
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答:可能的原因有:
1、膜没有完全均匀湿透,建议 使用100% methanol浸透膜;
2、洗膜不充分,可以增加洗液体积和洗涤次数;
3、电极不平衡或者加样位置偏斜,可以调整电极和加样;
4、封闭物用量不足,可以提高封闭物浓度,孵育时保证封闭液完全浸没转印膜;
5、封闭物使用不当,比如检测生物素标记的蛋白时不可用脱脂奶粉封闭;
6、封闭时间不够,一般情况下室温37度封闭1小时以上或者4度封闭过夜;
7、抗体非特异性结合,可以降低抗体浓度,减少孵育时间;
8、一抗稀释度不适宜,可以对抗体进行滴度测试,选择适宜的抗体稀释度;
9、一抗孵育的温度偏高,建议4℃结合过夜;
10、抗体浓度过高或洗涤不够,建议降低抗体浓度,增加洗涤次数和时间;
11、化学显色底物过多,建议按说明书加入适量的显色底物。
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