淀粉分支酶(SBE)(EC 2.4.1.18)主要存在于植物中,是参与支链淀粉合成的关键酶,催化直链淀粉变为支链淀粉。测定淀粉分支酶(SBE)活性在淀粉生物合成、优质农作物品种选育和品质遗传改良研究中具有重要意义。本试剂盒提供了一种简单的比色法来检测植物组织、细菌等样本中SBE活性,其原理是:直链淀粉和碘结合后在660nm有特征光吸收,SBE使直链淀粉含量减少,从而降低了淀粉-碘复合物在660nm吸收值,一定时间内吸光度下降的百分率可以反映SBE活性。
酶标仪或可见分光光度计(能测660nm处的吸光度)
恒温箱、制冰机、低温离心机
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
去离子水
匀浆器(如果是组织样本)
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小;
2、样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作;
3、杂蛋白多,建议处理目的蛋白;
4、抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体;
5、抗体孵育时间过久,建议减少抗体孵育时间;
6、二抗与抗原有交叉反应,建议选择合适的封闭物;
7、二聚体或多聚体存在,建议增加蛋白质变性过程及强度;
8、底物显色与曝光时间过长,建议缩短显色及曝光的时间。
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