苯丙氨酸解氨酶(PAL,EC4. 3 1 5)广泛存在于各种植物和少数微生物中,是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶和限速酶,在动物体内尚未发现。与一些重要的次生物质如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关,在植物正常生长发育、抗病、抗逆反应中起重要作用。 本试剂盒提供了一种简单易用的比色法,用于分析生物样品中PAL的活性。其原理是苯丙氨酸解氨酶(PAL)催化L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸和氨,反式肉桂酸在290nm处有大吸收值,通过测定吸光值升高速率计算PAL活性。
酶标仪或紫外分光光度计(能测290nm处的吸光度)及恒温培养箱
96孔UV板或微量石英比色皿、可调节式移液枪及枪头
去离子水
匀浆器
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验,尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究,如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途,我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用,并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用;否则,可能导致结果异常。
5. 勤换吸头,避免各组分之间的交叉污染。
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答:可能的原因有:
1、膜没有完全均匀湿透,建议 使用100% methanol浸透膜;
2、洗膜不充分,可以增加洗液体积和洗涤次数;
3、电极不平衡或者加样位置偏斜,可以调整电极和加样;
4、封闭物用量不足,可以提高封闭物浓度,孵育时保证封闭液完全浸没转印膜;
5、封闭物使用不当,比如检测生物素标记的蛋白时不可用脱脂奶粉封闭;
6、封闭时间不够,一般情况下室温37度封闭1小时以上或者4度封闭过夜;
7、抗体非特异性结合,可以降低抗体浓度,减少孵育时间;
8、一抗稀释度不适宜,可以对抗体进行滴度测试,选择适宜的抗体稀释度;
9、一抗孵育的温度偏高,建议4℃结合过夜;
10、抗体浓度过高或洗涤不够,建议降低抗体浓度,增加洗涤次数和时间;
11、化学显色底物过多,建议按说明书加入适量的显色底物。
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