活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、过氧化氢、及其下游产物过氧化物和羟化物等,研究表明,机体95%以上的活性氧(ROS)都来自于线粒体,其失衡所致的氧化应激与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程有关。正常情况下,细胞内抗氧化防御系统与氧自由基处于平衡状态,细胞内活性氧(ROS)水平维持在较低的生理范围;在病理情况下,细胞内抗氧化系统与氧自由基的平衡被打破,细胞内活性氧水平过多,就可破坏线粒体酶类、脂类和核酸,使机体出现氧化应激,同时,活性氧还可攻击线粒体DNA产生氧化损伤,导致线粒体ATP合成减少、线粒体膜电位破坏等结构和功能变化。因此,通过检测活性氧的变化来判断线粒体的功能是否正常具有重要意义。本试剂盒提供了一荧光测定法,用于直接定量检测线粒体 ROS产生速率。其原理是荧光探针-还原型二氯荧光素 (2', 7'-dichlorodihy drofluores cin diacetate, DCFH-DA)可扩散通过线粒体膜,在线粒体内被酯酶水解,形成无荧光的DCFH,DCFH 迅速与ROS反应生成荧光物—氧化型二氯荧光素(2', 7'-dichlo rofluorescin,DCF)。将荧光强度随时间变化的数据点拟合,线性回归直线斜率与ROS产生的速率呈正比。
荧光酶标仪或多功能酶标仪、恒温培养箱、分析天平
全黑96孔板、可调节式移液枪及枪头
低温离心机、制冰机
去离子水
匀浆器或研钵
1. 实验过程中请穿戴实验服、口罩和乳胶手套。请按照生物实验室的国家安全规定进行实验,尤其是在检测血样或其他体液时。
2. 本试剂盒仅用于实验室科学研究,如果本试剂盒用于临床诊断或任何其他用途,我们将不对任何后果负责。
3. 本试剂盒应在有效期内使用,并请严格按照说明书进行存储。
4. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用;否则,可能导致结果异常。
5. 勤换吸头,避免各组分之间的交叉污染。
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答:可能的原因有:
1、胶浓度不对,不同浓度的胶跑出的蛋白条带的位置可能有所偏差,可以调整浓度;
2、抗体孵育不充分,建议增加抗体浓度,延长孵育时间;
3、酶失活,建议直接将酶和底物进行混合,如果不显色则说明酶失活了。选择在有效期内、有活性的酶联物;
4、目的蛋白存在翻译后修饰或剪切体,建议查询相关文献确定;
5、标本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低,建议设置阳性对照比对结果,增加标本上样量。
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